Acasalamento e separação da Tétrade Chlamydomonas reinhardtii Para análise genética
Summary
Acasalamento e separação tetrad são necessários para análise genética em<em> Chlamydomonas reinhardtii</em>. Aqui demonstramos métodos padrão para a gametogênese, o acasalamento de germinação, zigoto e dissecção tétrade. Este protocolo consiste de uma série fácil de seguir de etapas que farão abordagens genéticas passíveis de cientistas que estão menos familiarizados com<em> Chlamydomonas</em>.
Abstract
A alga verde unicelular<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> (<em> Chlamydomonas</em>) Tornou-se um organismo popular para pesquisas em diversas áreas da biologia celular e genética por causa do seu ciclo de vida simples, facilidade de cultivo e manipulação de análise genética, genômica recursos, e transformabilidade do núcleo e ambas as organelas. Cepas de acasalamento é uma prática comum quando abordagens genéticas são usados em<em> Chlamydomonass</em>, Para criar diplóides vegetativo para a análise de dominância, ou após a dissecção tetrad à herança nuclear vs organellar verificar, testar alelismo, para analisar epistasia, ou para gerar populações com a finalidade de mapa-base de clonagem. Além disso, cruzamentos genéticos são usados rotineiramente para combinar com genótipos organellar especial genótipos nuclear. Aqui demonstramos métodos padrão para a gametogênese, o acasalamento de germinação, zigoto e separação tétrade. Este protocolo consiste de uma série fácil de seguir de etapas que farão abordagens genéticas passíveis de cientistas que estão menos familiarizados com<em> Chlamydomonas</em>. Parâmetros-chave e pontos de conflito são explicados. Finalmente, os recursos para obter mais informações e métodos alternativos são fornecidos.
Protocol
Discussion
Análise genética é simples em Chlamydomonas, mas exige técnicas específicas para gerar gametas e progênie tetrad separado. Com cepas saudável, as técnicas são facilmente adquiridos. Com alguns mutantes, torna-se mais de uma arte, e os leitores devem consultar Volume 1 do Livro de Chlamydomonas recentemente publicado por notas históricas e dicas práticas. Além disso, deve-se notar que há muitas variações sobre o tema básico descrito acima, que vão desde o método para induzir g…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este protocolo é baseado em técnicas aprendidas no laboratório de Francis-André Wollman na França Institut de Biologie Physico-Chimique, Paris,. Os autores têm uma dívida de gratidão para com Jacqueline Girard-Bascou, que originalmente introduzido DBS para Chlamydomonas técnicas genéticas. Chlamydomonas pesquisa no laboratório dos autores é suportado pelo National Science Foundation prêmio MCB-0646350.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
Referenzen
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
