El apareamiento y la separación de la Tétrada Chlamydomonas reinhardtii Para el análisis genético
Summary
Apareamiento y la separación tétrada se requieren para el análisis genético en<em> Chlamydomonas reinhardtii</em>. Aquí nos demuestran los métodos estándar para la gametogénesis, el apareamiento, la germinación de cigoto y la disección tétrada. Este protocolo consiste en una serie fácil de seguir los pasos que harán que los enfoques genéticos susceptibles de científicos que están menos familiarizados con<em> Chlamydomonas</em>.
Abstract
El alga verde unicelular<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> (<em> Chlamydomonas</em>) Se ha convertido en un organismo popular para la investigación en diversas áreas de biología celular y genética, debido a su ciclo de vida simple, facilidad de crecimiento y la manipulación para el análisis genético, recursos genómicos, y capacidad de transformación del núcleo y orgánulos ambos. Cepas de apareamiento es una práctica común cuando los métodos genéticos se utilizan en<em> Chlamydomonass</em>, Para crear diploides vegetal para el análisis de la dominación, o después de la disección tétrada a la herencia determinar nuclear vs organellar, para poner a prueba alelismo, para analizar epistasy, o para generar poblaciones con el objeto de mapa basado en la clonación. Además, los cruces genéticos se utilizan habitualmente para combinar genotipos organellar con especial genotipos nuclear. Aquí nos demuestran los métodos estándar para la gametogénesis, el apareamiento, la germinación de cigoto y la separación tétrada. Este protocolo consiste en una serie fácil de seguir los pasos que harán que los enfoques genéticos susceptibles de científicos que están menos familiarizados con<em> Chlamydomonas</em>. Parámetros clave y los puntos conflictivos se explican. Finalmente, los recursos para obtener más información y los métodos alternativos se proporcionan.
Protocol
Discussion
El análisis genético es simple en Chlamydomonas, pero requiere de técnicas específicas para generar gametos y progenie tétrada separado. Con cepas sanas, las técnicas son fáciles de adquirir. Con algunas cepas mutantes, se convierte más en un arte, y los lectores deben consultar el volumen 1 del Libro recientemente publicado Chlamydomonas de notas históricas y consejos prácticos. Además, debe tenerse en cuenta que hay muchas variaciones sobre el tema básico descrito anteriormente, …
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este protocolo se basa en las técnicas aprendidas en el laboratorio de Francis-André Wollman en el Instituto de Francia Biologie físico-Chimique, París,. Los autores tienen una deuda de gratitud a Jacqueline Girard-Bascou, que originalmente presentó a las técnicas de estimulación cerebral profunda Chlamydomonas genética. Chlamydomonas la investigación en laboratorio de los autores con el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias premio MCB-0646350.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
Referenzen
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
