Wiederholte Blutentnahme aus der Vena subclavia einer bewussten Ratte
Summary
Das vorliegende Protokoll beschreibt eine einfache und effiziente Methode zur Blutentnahme aus der Vena subclavia bei Ratten. Es ermöglicht eine schnelle, zeitnahe und leicht identifizierbare Probenahme ohne Anästhesie und erhält qualitativ hochwertiges Blut durch wiederholte Probenentnahme.
Abstract
Ratten werden häufig in pharmakokinetischen (PK) und toxikokinetischen (TK) Studien verwendet, bei denen zu bestimmten Zeitpunkten eine bestimmte Menge Blut gesammelt werden muss, um die Arzneimittelexposition nachzuweisen. Die Rattenblutentnahmemethode bestimmt die Qualität des Plasmas und beeinflusst darüber hinaus die Genauigkeit der Testergebnisse. Die in diesem Protokoll beschriebene Blutentnahmemethode der Subclavia-Vene sammelt wiederholt Blutproben im Bewusstseinszustand von Tieren, um die Anforderungen von PK- und TK-Tests zu erfüllen. Die Fähigkeiten der zurückhaltenden Handhabung und das geeignete Verfahren der Nadelstiche gewährleisten die Erfolgsrate der Blutentnahme. Es ist einfach zu bedienen und gewährleistet gleichzeitig die Qualität des Plasmas und trägt gleichzeitig dem Tierwohl Rechnung. Diese Methode erfordert jedoch eine fachmännische Bedienung, und eine unsachgemäße Methode kann Tierschwäche, Schmerzen, Lahmheit und sogar Sterblichkeit verursachen. Die aktuelle Methode wurde in der Testeinrichtung für eine 4-wöchige orale Toxizitätsstudie an Sprague Dawley (SD) Ratten mit TK angewendet. Die maximale Blutmenge, die innerhalb von 24 Stunden entnommen wurde, überstieg 20 % des Gesamtblutes des Tieres nicht. Das Körpergewicht der Tiere betrug mehr als 200 g bei Männchen und Weibchen. Die Daten zeigten, dass das Körpergewicht der Tiere jede Woche stetig zunahm und die klinische Beobachtung nach wiederholter Probenentnahme normal war.
Introduction
Gemäß den Richtlinien der Internationalen Konferenz zur Harmonisierung der technischen Anforderungen für die Registrierung von Humanarzneimitteln (ICH)1 und den Richtlinien der National Medical Products Administration (NMPA)2 muss die Anzahl der Blutentnahmezeitpunkte von Ratten in der toxikokinetischen Studie (TK) den Anforderungen der dynamischen Arzneimittelexpositionsbewertung entsprechen. Das ungefähre Gesamtblutvolumen einer Ratte beträgt 55-70 ml/kg Körpergewicht3. Die Entnahmezeitpunkte sind in der Regel innerhalb von 30 Minuten nach der Verabreichung intensiv und nehmen danach ab, und mehr als zehn Blutproben müssen innerhalb von 48 Stunden in Routinetestsentnommen werden 4. Zum Beispiel werden Blutproben zu 12 Zeitpunkten (0 min, 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 45 min, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 8 h und 12 h) in der TK-Studie von oral verabreichten Medikamenten gesammelt. Forscher müssen wiederholt 200-250 μL Blut bei Ratten sammeln, um qualitativ hochwertiges Plasma für den TK-Testzu erhalten 5.
Die Blutentnahmestellen bei Ratten umfassen Schwanzblutgefäße, retroorbitale Plexusvene, submandibuläre Vene, Herz, Bauchaorta6 und so weiter. Unter ihnen ist die Blutentnahme aus der Schwanzvene von Ratten eine häufig verwendete Methode, die erfahrene und erfahrene Bediener erfordert 7,8. Blut aus der retroorbitalen Plexusvene zu sammeln ist weniger kompliziert; Diese Methode wird jedoch nicht empfohlen, da sie das Sehvermögen der Rattenschädigen kann 9 und Blut aus dem Herzen und der Bauchaorta nur für die endgültige Blutentnahme10 geeignet ist. Es hat sich gezeigt, dass eine andere Methode zur Blutentnahme aus der Vena submandibularis bei einer bewussten Ratte zu mehr Komplikationen führt und eine unzureichende Blutprobenqualität aufzeigt11. Daher können Forscher das Tier betäuben, um die Schwierigkeit der Probenahme zu reduzieren. Dennoch erhöht die Anästhesie auch die Kosten des Experiments, und noch schlimmer ist, dass sie den Stoffwechselzustand von Ratten beeinflusst12. Das vorliegende Protokoll verwendet eine schnelle und unkomplizierte Methode zur Blutentnahme in den Subclavia-Venen von Ratten ohne Anästhesie, die eine genaue Positionierung und eine bilaterale alternierende Blutentnahme ermöglicht, um rechtzeitig und wiederholt qualitativ hochwertige Proben zu erhalten.
Protocol
Representative Results
Discussion
Es gibt bestimmte Vorteile der Blutentnahme aus den Venen subclavia. (1) Da der Ort der Blutentnahme leicht dissoziiert ist und der Venenplexus aufgrund der unterschiedlichen Körperhaltungen der Ratten nicht regelmäßig ist, kann die beschriebene Methode die Position des Venenplexus leicht lokalisieren, während die stabilen und bequemen Körperhaltungen der Ratten beibehalten werden. (2) Die Operation ist einfach und günstig für die schnelle Entwicklung der Fähigkeiten der Techniker und weniger Schmerzen für Tiere…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Forschung wurde vom Guangdong Provincial Key Laboratory of Drug Non-clinical Evaluation and Research (Nr. 2018B030323024) und dem Schlüsselprogramm “New Drug Creation” des Guangdong Key Research and Development Plan (Nr. 2019B020202001), dem Guangzhou Fundamental and Application Foundation Research Project (Nr. 202002030249 und Nr. 202002030156) finanziert.
Materials
| 1.0 mL syringe (with needle, 26 G, 0.45 mm x 15.5 mm) | Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD.(Nanchang, Jiangxi Province, China) | 20210629 | |
| 75% alcohol | Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd. (Dezhou, Shandong Province, China) | 210717 | |
| Animal source | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. | grade: SPF | laboratory animal production license number: SCXK (Hunan) 2019-0004, laboratory animal quality certificate number: 4307272101972847 |
| Cotton swab | Caoxian Hualu Sanitary Materials Co., Ltd.(Heze, Shandong Province, China) | 20210301 | Need to be sterilized. |
| Electric shaver | Shenzhen Codos Electric Appliance Co. , Ltd.(Shenzhen, Guangdong Province, China) | CP-6800 | |
| EP tube, 1.5 mL | Genetimes ExCell Technology,Inc.(Shanghai, China) | ||
| Heparin sodium (2 mL:12500 IU) | Tianjin biochem pharmaceutical Co.,Ltd(Tianjing, China) | 51200702 | Prepare 1250 IU/mL heparin sodium solution. Add heparin sodium solution into the EP tube in advance and make it evenly distributed on the wall of the EP tube, and dry it at 60°C for use. |
| Labtip (volume range 5-200 μL) | Thermo Fisher Scientific Oy | 94300120 | |
| Low speed refrigerated centrifuge | Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.(Changsha, Hunan Province, China) | L535R | |
| Pipette gun (20-200 μL) | BRAND | 12N92305 | |
| Rats (SD) | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan Province, China) | ||
| Sharp tool container | Taizhou Huangyan Yikang Plastic Factory (Taizhou, Zhejiang Province, China) | ||
| Eye drop | This reagent is not a commodity and the manufacturer requires it to be tested. In the principle of confidentiality, the manufacturer and model cannot be provided. |
Referencias
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