Prélèvement sanguin répétitif dans la veine sous-clavière d’un rat conscient

Summary

Le présent protocole décrit une méthode simple et efficace pour prélever du sang dans la veine sous-clavière chez le rat. Il permet un prélèvement rapide, rapide et facilement identifiable sans anesthésie et permet d’obtenir du sang de haute qualité grâce à des prélèvements répétitifs d’échantillons.

Abstract

Les rats sont largement utilisés dans les études pharmacocinétiques (PK) et toxicocinétiques (TK) qui doivent recueillir une certaine quantité de sang à des moments précis pour détecter l’exposition aux médicaments. La méthode d’échantillonnage du sang de rat détermine la qualité du plasma et affecte davantage la précision des résultats des tests. La méthode de prélèvement sanguin dans les veines sous-clavières décrite dans ce protocole prélève des échantillons de sang à plusieurs reprises dans l’état conscient des animaux pour répondre aux besoins des tests pharmacocinétique et TK. Les compétences de manipulation de contention et la procédure appropriée d’incision de l’aiguille assurent le taux de réussite de la collecte de sang. Il est facile à utiliser tout en assurant la qualité du plasma et en même temps en veillant au bien-être animal. Cependant, cette méthode nécessite une opération habile, et une mauvaise méthode peut causer la faiblesse, la douleur, la boiterie et même la mortalité des animaux. La méthode actuelle a été utilisée dans l’installation d’essai pour une étude de toxicité orale de 4 semaines chez des rats Sprague Dawley (SD) avec TK. La quantité maximale de sang prélevée dans les 24 heures ne dépassait pas 20 % du sang total de l’animal. Le poids corporel des animaux était supérieur à 200 g pour les mâles et les femelles. Les données ont montré que le poids corporel des animaux augmentait régulièrement chaque semaine et que l’observation clinique était normale après un prélèvement répétitif d’échantillons.

Introduction

Selon les lignes directrices¹ de la Conférence internationale sur l’harmonisation des exigences techniques pour l’enregistrement des produits pharmaceutiques à usage humain (ICH) et les lignes directrices² de la National Medical Products Administration (NMPA), le nombre de points temporels de prélèvement sanguin des rats dans l’étude toxicocinétique (TK) doit répondre aux exigences de l’évaluation dynamique de l’exposition aux médicaments. Le volume sanguin total approximatif d’un rat est de 55 à 70 mL/kg de poids corporel³. Les points de temps de collecte sont généralement intensifs dans les 30 minutes suivant l’administration et diminuent par la suite, et plus de dix échantillons de sang doivent être prélevés dans les 48 heures dans les tests de routine⁴. Par exemple, des échantillons de sang sont prélevés à 12 moments (0 min, 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 45 min, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 8 h et 12 h) dans l’étude des savoirs traditionnels sur les drogues administrées par voie orale. Les chercheurs doivent prélever à plusieurs reprises de 200 à 250 μL de sang chez le rat afin d’obtenir du plasma de haute qualité pour le test TK⁵.

Les sites de collecte de sang chez les rats comprennent les vaisseaux sanguins de la queue, la veine du plexus rétro-orbitaire, la veine sous-maxillaire, le cœur, l’aorte abdominale⁶, etc. Parmi eux, la collecte de sang dans la veine caudale des rats est une méthode fréquemment utilisée, qui nécessite des opérateurs expérimentés et qualifiés ^7,8. Recueillir du sang dans la veine rétro-orbitaire du plexus est moins compliqué; Cependant, cette méthode n’est pas recommandée car elle peut endommager la vue des rats⁹, et le sang du cœur et de l’aorte abdominale ne convient que pour le prélèvement sanguin final¹⁰. Une autre méthode de prélèvement de sang dans la veine sous-maxillaire chez un rat conscient s’est avérée entraîner plus de complications et a révélé une qualité d’échantillon de sang insuffisante¹¹. Par conséquent, les chercheurs peuvent anesthésier l’animal pour réduire la difficulté d’échantillonnage. Pourtant, l’anesthésie augmente également le coût de l’expérience, et plus sérieusement, elle affectera l’état métabolique des rats¹². Le présent protocole utilise une méthode rapide et simple de prélèvement de sang dans les veines sous-clavières de rats sans anesthésie, permettant un positionnement précis et une collecte de sang alternée bilatérale pour obtenir des échantillons de haute qualité en temps opportun et de manière répétée.

Protocol

Toutes les expériences sur les animaux décrites ont été approuvées par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux (IACUC) de Guangdong Lewwin Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd. Des rats Sprague Dawley (SD) mâles et femelles, ~ 6-11 semaines ont été utilisés pour les expériences. Les rats ont été élevés conformément aux directives relatives au soin et à l’utilisation des animaux de laboratoire13. 1. Préparation des …

Representative Results

Les bons échantillons de plasma de la veine sous-clavière étaient jaune pâle translucides (figure 4, tube gauche). Une mauvaise collecte ou manipulation de sang a entraîné une hémolyse (figure 4, le tube droit). Les données de l’installation d’essai ont montré que dans une étude de toxicité orale de 4 semaines d’un collyre chez des rats SD atteints de TK, des échantillons de sang ont été prélevés deux fois à 9 m…

Discussion

Il y a certains avantages à recueillir du sang dans les veines sous-clavières. (1) Comme le site de prélèvement sanguin est facilement dissocié et que le plexus veineux n’est pas régulier en raison des différentes postures des rats, la méthode décrite peut facilement localiser la position du plexus veineux tout en maintenant les postures stables et confortables des rats. (2) L’opération est facile et favorable au développement rapide des compétences des techniciens et moins de douleur pour les animaux. (3…

Materials

1.0 mL syringe (with needle, 26 G, 0.45 mm x 15.5 mm)	Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD.(Nanchang, Jiangxi Province, China)	20210629
75% alcohol	Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd. (Dezhou, Shandong Province, China)	210717
Animal source	Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd.	grade: SPF	laboratory animal production license number: SCXK (Hunan) 2019-0004, laboratory animal quality certificate number: 4307272101972847
Cotton swab	Caoxian Hualu Sanitary Materials Co., Ltd.(Heze, Shandong Province, China)	20210301	Need to be sterilized.
Electric shaver	Shenzhen Codos Electric Appliance Co. , Ltd.(Shenzhen, Guangdong Province, China)	CP-6800
EP tube, 1.5 mL	Genetimes ExCell Technology,Inc.(Shanghai, China)
Heparin sodium (2 mL:12500 IU)	Tianjin biochem pharmaceutical Co.,Ltd(Tianjing, China)	51200702	Prepare 1250 IU/mL heparin sodium solution. Add heparin sodium solution into the EP tube in advance and make it evenly distributed on the wall of the EP tube, and dry it at 60°C for use.
Labtip (volume range 5-200 μL)	Thermo Fisher Scientific Oy	94300120
Low speed refrigerated centrifuge	Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.(Changsha, Hunan Province, China)	L535R
Pipette gun (20-200 μL)	BRAND	12N92305
Rats (SD)	Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan Province, China)
Sharp tool container	Taizhou Huangyan Yikang Plastic Factory (Taizhou, Zhejiang Province, China)
Eye drop			This reagent is not a commodity and the manufacturer requires it to be tested. In the principle of confidentiality, the manufacturer and model cannot be provided.