فرخ في electroporation البيضة هو الأسلوب الذي يسمح التلاعب الجيني للجنين الطيور. التطبيقات الشائعة لهذه التقنية تشمل تحليل وظيفي من الجينات وعناصر محسن المفترضة. هذا الفيديو يوضح العصبية electroporation أنبوب في الأجنة سمو الفرخ 10. وتناقش تقنية الحقن والتعامل السليم البيض.
Abstract
جعلت حجم كبير والتنمية الخارجية للجنين الدجاج طويلة يجعلها أداة قيمة في دراسة البيولوجيا التطورية. مع ظهور التقنيات البيولوجية الجزيئية ، وأصبح نظام الفرخ مفيدة للدراسة تنظيم الجينات ووظائفها. electroporating بواسطة الحمض النووي الريبي أو يبني في جنين الدجاج النامية ، يمكن التعبير عن الجينات أو ترسيتها من أجل تحليل وظائف الجينات في الجسم الحي. وبالمثل ، يمكن أن تستخدم لرسم خرائط البنى مراسل مصير أو لدراسة العناصر الجينية المفترضة التنظيمية. بالمقارنة مع تجارب مماثلة في الماوس ، وقد فرخ electroporation مزايا يجري سريعة وسهلة وغير مكلفة. هذا الفيديو يوضح أولا كيف لجعل نافذة في قشرة البيضة لمعالجة الجنين. المقبل ، والجنين هو تصور بمحلول مخفف من الحبر الهند حقن تحت الجنين. وتستخدم إبرة الزجاج وماصة لحقن الحمض النووي وصبغ الأخضر السريع في الأنبوب العصبي النامي ، ثم يتم وضع أقطاب البلاتين موازية للجنين وتدار النبضات الكهربائية قصيرة مع مولد النبض. وأخيرا ، ختم الشريط مع البيض ويوضع مرة أخرى في حاضنة لمزيد من التطوير. بالإضافة إلى ذلك ، يظهر الشريط الصحيح التخزين والمناولة والبيض يناقش الأسباب المحتملة لفقدان الجنين electroporation التالية.
Protocol
التعامل مع البيض يجوز إبقاء البيض على 13 درجة مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد قبل الحضانة دون خسائر كبيرة في البقاء (أ برودة النبيذ الصغيرة مثالية لهذا الغرض). قبل الحضانة ، والسماح لتدفئة البيض…
Discussion
هذا البروتوكول يوفر دليل خطوة بخطوة لelectroporation الأنبوب العصبي للأجنة الدجاج HH10. بالإضافة إلى عرض هذه التقنية ، كما تقدم مبادئ توجيهية للتخزين والمناولة من البيض. هذه التقنية لديها مجموعة واسعة من التطبيقات للتحليل الوراثي والتكلفة المنخفضة وسهولة من التجارب يجعلها ممكنة للمخت?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Chicken egg incubator
humidified, set to 37.80°C (100F).
Pulse generator
Genetronics
BTX T820
Square wave generator or comparable
Electrodes
our electrodes were made from 0.25 mm diameter platinum wire and were 5 mm long and spaced 1 mm apart
Connecter cables
Micromanipulator
Dissecting scope
with large working distance
Glass capillaries
and capillary puller or commercial glass needles
Leibovitz’s L-15 media
chicken eggs
fertilized
Curved scissors
10 ml syringe
Large bore needle
16-18G
Mouth pipette
India ink
Insulin syringe/syringe
Plasmid DNA
≥ 1µg/µl in sterile TE or 1X PBS containing 0.05% Fast Green dye