HH 스테이지 10 치킨 태아의 비켜 Electroporations에서
Summary
비켜 electroporation의 여자는 조류 배아의 유전자 조작을 허용하는 기법입니다. 이 기법의 일반적인 응용 프로그램은 유전자와 putative 향상제 요소의 기능 분석을 포함합니다. 이 동영상은 HH 10 여자는 배아에서 신경 튜브 electroporation을 보여줍니다. 사출 기술과 적절한 계란 처리는 설명합니다.
Abstract
대형 크기와 닭 배아의 외부 개발 오래 발달 생물학 연구에 가치있는 도구가 만들었습니다. 분자 생물 학적 기법의 도래와 함께, 여자가 유전자 조절과 기능을 연구하는 유용한 시스템이되고있다. 개발 닭 배아에 DNA 또는 RNA 구조를 electroporating함으로써, 유전자는 명시적 또는 생체내 유전자 기능의 분석을 위해 무너뜨렸다 수 있습니다. 마찬가지로 기자의 구성은 운명 매핑에 사용할 수 또는 putative 유전자 규제 요소를 검사합니다. 마우스에서 유사한 실험에 비해, 여자의 electroporation은 빠르고 쉽고 저렴한되는 장점이 있습니다. 이 비디오는 배아를 조작하기 위해 달걀 껍질에 창문을 만드는 방법 첫째 보여줍니다. 다음, 난자는 배아 아래 주입 인도 잉크의 희석 용액과 시각이다. 유리 바늘과 피펫은 개발 신경 튜브 다음, 백금 전극이 배아로 병렬 배치하고 짧은 전기 펄스가 펄스 발생기와 함께 관리되는에 DNA와 빠른 그린 염료를 주입하는 데 사용됩니다. 마지막으로 계란은 테이프로 밀봉하고 발전을위한 인큐베이터에 다시 배치. 또한, 비디오 적절한 계란 보관 및 처리를 보여줍 배아 손실 다음의 electroporation의 가능한 원인에 대해 설명합니다.
Protocol
Discussion
이 프로토콜은 HH10 여자는 태아의 신경 튜브 electroporation 단계 가이드에 의해 단계를 제공합니다. 기술을 보여주는 이외에도, 스토리지 및 계란의 취급에 대한 지침도 제공됩니다. 이 기술은 유전자 분석을위한 어플 리케이션의 광범을 가지고 있으며, 실험의 용이성과 낮은 비용으로 많은 실험실 위해이 가능합니다.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chicken egg incubator | humidified, set to 37.80°C (100F). | |||
| Pulse generator | Genetronics | BTX T820 | Square wave generator or comparable | |
| Electrodes | our electrodes were made from 0.25 mm diameter platinum wire and were 5 mm long and spaced 1 mm apart | |||
| Connecter cables | ||||
| Micromanipulator | ||||
| Dissecting scope | with large working distance | |||
| Glass capillaries | and capillary puller or commercial glass needles | |||
| Leibovitz’s L-15 media | ||||
| chicken eggs | fertilized | |||
| Curved scissors | ||||
| 10 ml syringe | ||||
| Large bore needle | 16-18G | |||
| Mouth pipette | ||||
| India ink | ||||
| Insulin syringe/syringe | ||||
| Plasmid DNA | ≥ 1µg/µl in sterile TE or 1X PBS containing 0.05% Fast Green dye |
References
- Itasaki, N., Bel-Vialar, S., Krumlauf, R. 'Shocking' developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression. Nat Cell Biol. 1, 203-207 (1999).
