Ce manuscrit présente un protocole pour induire l’encéphalomyélite autoimmune expérimentale active (EAE) chez les souris. Une méthode pour l’isolement et la caractérisation des lymphocytes infiltrés dans le système nerveux central (SNC) est également présentée pour montrer comment les lymphocytes sont impliqués dans le développement de la maladie auto-immune de CNS.
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Article de méthode
Analyse cytométrique du flux de l’infiltration de lymphocytes dans le système nerveux central pendant l’encéphalomyélite autoimmune expérimentale
Dans cet article
Résumé
Résumé
La sclérose en plaques (SP) est une maladie auto-immune du système nerveux central (SNC) causée par la combinaison de facteurs environnementaux et de milieux génétiques sensibles. L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) est un modèle typique de la maladie de MS largement utilisé pour étudier la pathogénie dans laquelle les lymphocytes T spécifiques aux antigènes de myéline initient une réaction inflammatoire dans le SNC. Il est très important d’évaluer comment les lymphocytes du SNC régulent le développement de la maladie. Cependant, l’approche pour mesurer la quantité et la qualité des lymphocytes infiltrés dans le SNC est très limitée en raison des difficultés à isoler et à détecter les lymphocytes infiltrés du cerveau. Ce manuscrit présente un protocole qui est utile pour l’isolement, l’identification, et la caractérisation des lymphocytes infiltrés du SNC et sera utile pour notre compréhension de la façon dont les lymphocytes sont impliqués dans le développement de la maladie auto-immune du SNC.
Introduction
En tant que maladie de démyélinisation chronique du SNC, la SP touche environ 2,5 millions de personnes dans le monde et manque de traitements curatifs1. Il est également considéré comme une maladie auto-immune, dans laquelle les lymphocytes T spécifiques à l’antigène myélin initient une réaction inflammatoire et conduisent à la démyélinisation et aux lésions axonales dans le SNC2. L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) a été largement utilisée pour étudier les mécanismes pathogènes de la SP comme modèle classique de maladie auto-immune de la maladie de démyélinisation dans le SNC3. Il....
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Protocole
Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par le comité animal de l’École des sciences médicales de base de l’Université Jiao Tong de Shanghai.
1. Préparation des matériaux
- Utilisez la séquence MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK de MOG35–55 pour obtenir le peptide lyophilisé de sources commerciales. Assurez-vous que la pureté du peptide est >95%. Préparer une solution de bouillon de MOG de 10 mg/mL dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et conserver à -20 °C.
- Préparer une solution de stock de 4 mg/mL de M. tuberculosis H37 Ra en mettant un tube de 100 mg de M. tube H37 Ra dans 25 ml d’Adjuva....
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Résultats
Après la vaccination des souris C57BL/6, toutes les souris ont été pesées, examinées et classées quotidiennement pour des signes neurologiques. Le cours clinique représentatif de l’EEE devrait entraîner une courbe de la maladie telle qu’elle est présentée à la figure 2A et un changement de poids corporel chez la souris tel que présenté à la figure 2B. C57BL/6 souris immunisées avec MOG35-55 ont généralement commencé à développer des symptômes de la maladie vers .......
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Discussion
Cette étude présente un protocole pour induire et surveiller l’EAE à l’aide de MOG35-55 chez les souris C57BL/6, qui sont considérées comme un modèle animal expérimental neuroimmunologique typique de la SP. EAE peut être induit variant les souches de souris ou le type de protéine utilisé pour l’induction selon le but de l’étude. Par exemple, l’utilisation du peptide PLP139–151 chez les souris SJL peut induire un cours de la maladie eae qui est particulièrement bien adapté pour évaluer les effets thérapeutiques sur les re.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont pas de conflits d’intérêts à déclarer.
Remerciements
Cette recherche a été soutenue par la subvention de la National Natural Science Foundation of China (31570921 à ZJ, 81571533 à LS), la Commission municipale de la santé de Shanghai et la planification familiale (201540206 à ZJ), la subvention de recherche de l’hôpital Ruijin Nord (2017ZX01 à ZJ).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor700 anti-souris CD45.2 | eBioscience | 56-0454-82 | |
| Anti-souris CD16/CD32 Fc block | BioLegend | 101302 | |
| APC anti-souris IFN-g | eBioscience | 17-7311-82 | |
| BD LSRFortessa X-20 | BD | ||
| Dounce homogénéisateur | Wheaton | 353107542 | |
| eBioscience Cocktail de stimulation cellulaire (plus inhibiteurs de transport de protéines) (500X) | eBioscience | 00-4975-03 | |
| eBioscience Fixation intracellulaire & Ensemble de tampons de perméabilisation | eBioscience | 88-8824-00 | |
| FITC anti-souris CD3 | BioLegend | 100203 | |
| FITC Rat IgG2b, &kappa ; Isotype Ctrl Anticorps | BioLegend | 400605 | |
| Adjuvant complet de Freund (CFA) | Sigma-Aldrich | F5881 | |
| Souris IgG2a kappa Contrôle de l’isotype (eBM2a), Alexa Fluor 700, eBioscience | eBioscience | 56-4724-80 | |
| Mycobacterium tuberculosis H37 Ra | Difco Laboratories | 231141 | |
| PE anti-souris IL-17A | eBioscience | 12-7177-81 | |
| PE/Cy7 anti-souris CD4 | BioLegend | 100422 | |
| PE/Cy7 Rat IgG2b, &kappa ; Isotype Ctrl Anticorps | BioLegend | 400617 | |
| Percoll | GE | 17-0891-01 | |
| PerCP/Cy5.5 anti-souris CD11b | BioLegend | 101228 | |
| PerCP/Cy5.5 Rat IgG2b, &kappa ; Isotype Ctrl Anticorps | BioLegend | 400631 | |
| toxine coqueluche (PTX) | Sigma-Aldrich | P-2980 | |
| Rat IgG1 kappa Isotype Control (eBRG1), APC, eBioscience | eBioscience | 17-4301-82 | |
| Rat IgG2a kappa Isotype Control (eBR2a), PE, eBioscience | eBioscience | 12-4321-80 | |
| Rat MOG35&ndash ; 55 peptides | Biosynth International | MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK |
Références
- Milo, R., Kahana, E. Multiple sclerosis: geoepidemiology, genetics and the environment. Autoimmunity Reviews. 9, 387-394 (2010).
- Gold, R., Linington, C., Lassmann, H.
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Réimpressions et autorisations
