Summary
Dette papir præsenterer en økonomisk og effektiv protokol til undersøgelse af peroxidase-positive leukocytter i sæd. Ved hjælp af et computerassisteret sædanalysesystem (CASA) kan koncentrationen af peroxidase-positive leukocytter i sæd opnås inden for i alt 60 minutter, hvilket effektivt forbedrer effektiviteten af andrologilaboratoriet og andrologerne.
Abstract
Leukocytospermi kan føre til nedsat spermatozomotilitet, øgede spermatozoer morfologiske abnormiteter, forhøjet spermatozo DNA-fragmenteringsindeks, forringelse af spermatozoernes akrosomfunktion og endda påvirket embryonal udvikling. Det er en almindelig andrologisk sygdom i klinisk praksis og en af de vigtige årsager til mandlig infertilitet. Ved bestemmelse af, om der findes betændelse i de reproduktive kanaler hos mænd, vælger androloger ofte at undersøge runde celler eller sædplasmaelastase i sæden som et klinisk diagnostisk grundlag. Undersøgelsen af runde celler påvirkes imidlertid let af sloughed spermatogene celler og reproduktive epitelceller, som ikke bidrager til at reducere den vilkårlige og unødvendige brug af antibiotika. Samtidig er detektionsprocessen for elastase relativt kompliceret, tidskrævende og langsom i rapporteringen af resultater, hvilket ikke er gavnligt for tidlig diagnose og behandling af sygdomme som mandlige kønsorgansinfektioner (MGTI'er). Vi har innovativt anvendt undersøgelsen af peroxidase-positive leukocytter i sæd assisteret af et computerassisteret sædanalysesystem (CASA) som et diagnostisk kriterium for leukocytospermi, med succes at løse disse problemer. Denne undersøgelse kræver kun tilsætning af driftsvæsken bestående af fire reagenser i prøven, og den samlede reaktionstid ved stuetemperatur kan styres inden for 20-30 minutter. Ved den efterfølgende udtværing og mikroskopiske undersøgelse kan koncentrationen af peroxidase-positive leukocytter i sæd opnås inden for i alt 60 minutter, som kan bruges til at diagnosticere, om betændelsen i den mandlige reproduktive kanal eksisterede.
Introduction
Infertilitet er opstået som et globalt folkesundhedsproblem, der påvirker ca. 15% af par i deres reproduktive alder. Mandlige faktorer bidrager med omkring 50% af de samlede subfertilitetstilfælde, og næsten 20% til 30% kan udelukkende tilskrives mandlige faktorer 1,2,3. Mandlige kønsorganer (MGTI'er) udgør en af de væsentlige årsager til mandlig infertilitet og tegner sig for ca. 15% af tilfældene 4,5.
De fleste individer har leukocytter i deres sæd, der udgør 13% af ikke-spermatozoiske celler, hvor differentielle proportioner er neutrofiler 12%, makrofager 0,9% og lymfocytter 0,1%6,7. Ifølge Verdenssundhedsorganisationens (WHO) laboratoriemanual til undersøgelse og behandling af human sæd (5. udgave) defineres leukocytospermi normalt som tilstedeværelsen af >1 × 106 celler / ml leukocytter i sæd8. Denne tilstand kan være forårsaget af mange faktorer såsom miljøgifte, stofmisbrug, varicoceles, MGTI'er osv., Som alle potentielt fører til en unormal stigning i leukocytkoncentrationen i sæd9. Leukocytter kan hæve niveauet af reaktive iltarter (ROS) i sæd, hvilket forårsager lipidperoxidering og oxidativ skade på protein og DNA, hvilket resulterer i nedsat spermatozomotilitet, øgede spermatozomorfologiske abnormiteter, forhøjet spermatozo-DNA-fragmenteringsindeks, forringelse af spermatozoernes akrosomfunktion og endda negative virkninger på embryoudvikling10,11.
I øjeblikket vælger androloger almindeligvis at undersøge runde celler i sæd eller elastase i sædplasma, når de identificerer betændelse i kønsorganerne. Det er dog ofte udfordrende at skelne mellem sloughed spermatogene celler og reproduktive epitelceller, som ikke bidrager til at reducere den vilkårlige og unødvendige brug af antibiotika6. Sidstnævnte undersøgelsesmetode er relativt kompliceret og tidskrævende med langsom resultatrapportering, hvilket ikke er gavnligt for tidlig diagnose og behandling af sygdomme som MGTI'er. American Urological Association (AUA) foreslår, at der foretages yderligere differentiering mellem leukocytter og sloughed celler fra kønsorganerne, når den runde cellekoncentration i sædanalyse er større end 1 × 106 celler / ml12. Nogle andrologilaboratorier bruger flowcytometri13 eller leukocytantigen (f.eks. CD45) immuncytokemi14 til at undersøge leukocytter. Selvom disse metoder er præcise, er de dyre og tidskrævende, hvilket gør storstilet klinisk implementering vanskelig, især i udviklingslande.
Peroxidase er bredt fordelt i forskellige typer celler og spiller en afgørende rolle i modstanden mod oxidativ stressskade. Myeloperoxidase (MPO) er medlem af peroxidase-underfamilien, der generelt udtrykkes i immunceller. Det udtrykkes højest i neutrofilers azurofile granulater15,16 og udtrykkes også i lymfocytter17,18, monocytter og makrofager19. Koncentrationen af leukocytter, især neutrofiler, i sæd kan opnås ved at undersøge runde celler, der er peroxidase-positive 7,20. For at gøre undersøgelsesprocessen for leukocytter i sæd økonomisk, praktisk og effektiv rekonstruerede vi undersøgelsesmetoden. Assisteret af det computerassisterede sædanalysesystem (CASA) kan koncentrationen af leukocytter opnås inden for 60 minutter. Denne nye metode reducerer patienternes undersøgelsesomkostninger og ventetid på at opnå resultater, letter arbejdsbyrden for laboratorieteknikere og forkorter lægens diagnose og behandlingsventetid.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne undersøgelse er blevet gennemgået og godkendt af den medicinske etiske komité for det tredje tilknyttede hospital ved Sun Yat-sen University.
1. Forberedelse af arbejdsløsningen
- Følgende reagenser samles af afgørende betydning til fremstilling af arbejdsopløsningen: ortho-toluidinsubstratopløsning, mættet ammoniumchloridopløsning (NH4Cl), 148 mmol/l ethylendiamintetraeddikesyredinatriumsaltopløsning (Na2EDTA) og 6% (v/v) hydrogenperoxidopløsning. Placer dem på en laboratoriebænk ved stuetemperatur (RT) sammen med det nødvendige værktøj, såsom overførselspipetter (1000 μL, 200 μL, 10 μL) og reagensglasstativer.
FORSIGTIG: Læs sikkerhedsdatabladet (SDS), før du håndterer ovennævnte reagenser. - Forbered en uigennemsigtig brun reagensflaske til opbevaring og beskyttelse af den forberedte arbejdsløsning mod udsættelse for lys.
- Reagenserne overføres til den uigennemsigtige brune reagensflaske i henhold til nedenstående forhold:
- Brug 200 μL overførselspipetten og juster skalaen til 100 μL ved at dreje på knappen. Derefter overføres 100 μL afNH4Cl-opløsningentil den uigennemsigtige brune reagensflaske.
- Sæt pipettespidsen på igen, og overfør 100 μL af 148 mmol/lNa2EDTA-opløsningen til den uigennemsigtige brune reagensflaske ved hjælp af ovennævnte 200 μL overførselspipette. Blæs derefter forsigtigt ved pipettering og homogeniser opløsningen grundigt.
- Brug 1000 μL overførselspipetten og juster skalaen til 900 μL ved at dreje på knappen. Derefter overføres 900 μL af ortho-toluidinsubstratopløsningen til den uigennemsigtige brune reagensflaske, blæses forsigtigt ved pipettering og homogeniseres opløsningen grundigt.
- Brug 10 μL overførselspipetten og juster skalaen til 5 μL ved at dreje på knappen. Derefter overføres 5 μL af 6% (v/v) hydrogenperoxidopløsningen til den uigennemsigtige brune reagensflaske.
- Brug 1000 μL overførselspipetten og juster skalaen til 1000 μL ved at dreje på knappen. Pipettespidsen udskiftes, blæses forsigtigt ved pipettering, og opløsningen homogeniseres grundigt i den uigennemsigtige brune reagensflaske.
- Opbevar den brugsklare arbejdsløsning i den uigennemsigtige brune reagensflaske på RT, væk fra lys. Arbejdsløsningen er reaktiv i 24 timer.
- Hver sædprøve kræver 900 μL af arbejdsløsningen. Sørg for, at mængden af arbejdsløsningen, der tilberedes hver dag, svarer til antallet af prøver, der undersøges dagligt.
2. Forberedelse af sædprøve
- Før du indsamler sædprøven, skal du sikre dig, at patienten har afholdt sig fra ejakulation i 2 til 7 dage som krævet i Verdenssundhedsorganisationens (WHO) laboratoriemanual til undersøgelse og behandling af menneskelig sæd (5. udg.) 8. Onani er den foretrukne metode til opnåelse af sædprøver. For at forbedre nøjagtigheden af undersøgelsen skal patienten instrueres om at opsamle al ejakuleret sæd.
- Stativet til konstant temperatur tændes, og der opvarmes på forhånd til 37 °C, således at den efterfølgende fortætning af sædprøven kan forløbe jævnt.
- Efter modtagelse af patientens sædprøve registreres omhyggeligt detaljerede oplysninger, herunder identifikationskode, opsamlingstid, afholdenhedsvarighed og andre relevante oplysninger på ydervæggen af den polymerbaserede beholder.
- Den polymerbaserede beholder, der huser sædprøven, anbringes på standen med konstant temperatur, der er forvarmet til 37 °C, hvilket er gavnligt for sædfortætningen.
- Træk sædprøven ind i en polymerbaseret pipette og observer tilstanden af fortætning hvert 5. minut, indtil sædprøven er fuldt flydende.
- Hvis sædprøven ikke er helt flydende inden for 30 minutter, skal du ikke udføre undersøgelsen endnu; Fortsæt med at vente i yderligere 30 minutter. Hvis sæden stadig ikke er helt flydende efter 60 minutter, tilsættes en lige så stor mængde fosfatbufferopløsning til en 1:1 fortynding og omrystes forsigtigt for at fremme fortætning.
- Efter grundig omrøring og konsekvent homogenisering opbevares den fuldt flydende sædprøve til de efterfølgende undersøgelsesprocedurer.
3. Farvning af de peroxidase-positive leukocytter og analyse af den oprindelige sædprøve
- Før prøveudtagning anvendes en polymerbaseret pipette til gentagne gange at blæse ved pipettering og homogenisere sædprøven grundigt under undersøgelse.
- Brug 200 μL overførselspipetten og juster skalaen til 100 μL ved at dreje på knappen. Sæt pipettespidsen på igen, og overfør derefter 100 μL af sædprøven til et centrifugeglas.
- Brug 1000 μL overførselspipetten og juster skalaen til 900 μL ved at dreje på knappen. Udskift pipettespidsen, og overfør derefter 900 μL af ovennævnte arbejdsløsning til centrifugerøret.
- Blæs gentagne gange ved pipettering og homogeniser reaktanten grundigt, som består af sædprøven og arbejdsløsningen, ved hjælp af 1000 μL overførselspipetten.
- Centrifugerøret anbringes i et reagensglasstativ på en todimensionel ryster, og det udsættes for kontinuerlig omrøring ved 200 o/min i 30 minutter ved RT.
- Mens du venter på farvningsreaktionen, skal du analysere sædprøven ved hjælp af CASA-systemet til at bestemme koncentrationen af spermatozoer i den originale sædprøve i den polymerbaserede beholder.
- Tænd for afbryderen på CASA-systemet, og dobbeltklik på ikonet SCA SCOPE for at åbne programsoftwaren.
- Før prøveudtagning blæses gentagne gange ved pipettering og homogeniseres den oprindelige sædprøve grundigt igen med en polymerbaseret pipette.
- Brug 10 μL overførselspipetten og juster skalaen til 10 μL ved at dreje på knappen. Udskift pipettespidsen, pipette 10 μL af den oprindelige sædprøve op, og anbring den i SCA-tællekammeret. Vent i 60 s på, at sædprøven holder op med at drive.
- Placer SCA-tællekammeret på prøveholderen i CASA-systemet, og indstil patientens oplysninger i dialogboksen i applikationssoftwaren for at forberede den formelle undersøgelse.
- Undersøg den originale sædprøve i SCA-tællekammeret med CASA-systemet ved at klikke på knappen Start og registrer de nødvendige data, såsom koncentrationen af spermatozoer.
4. Observation af peroxidase-positive leukocytter og spermatozoer
- Brug 1000 μL overførselspipetten og juster skalaen til 1000 μL ved at dreje på knappen. Udskift pipettespidsen, blæs derefter gentagne gange ved pipettering og homogeniser reaktanten grundigt, som består af sædprøve og arbejdsløsning i centrifugerøret igen ved afslutningen af 30 minutters reaktionsprocessen.
- Brug 10 μL overførselspipetten og juster skalaen til 10 μL ved at dreje på knappen. Udskift pipettespidsen, pipette 10 μL af ovennævnte reaktant op, og placer den i sædtællingskammeret. Til sidst skal du dække sædtællingskammeret med en dedikeret glasdæksel.
- Placer sædtællingskammeret på det mikroskopiske stadium, og tænd for afbryderen på det optiske mikroskop med to 10x okularer. Vent derefter i 60 s på, at reaktantprøven holder op med at drive.
- Skift mikroskopisk konverter til 10x objektivobjektiv i ventetiden. Juster derefter grovjusteringsknappen og finjusteringsknappen i rækkefølge. Endelig observere spermatozoer og runde celler under en forstørrelse på 10×10.
- Skift den mikroskopiske konverter til 40x objektivlinsen efter bestemmelse af synsfeltet, der skal analyseres, og observer spermatozoerne og brune peroxidase-positive leukocytter under en forstørrelse på 10 × 40.
- Brug det elektroniske tællersystem til at tælle mindst 200 spermatozoer og antallet af brune peroxidase-positive leukocytter inden for de tilsvarende felter.
5. Beregning af koncentrationen af peroxidase-positive leukocytter
- Beregn koncentrationen af peroxidase-positive leukocytter ved hjælp af følgende formel:
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ved implementering af ovennævnte procedure manifesterer reaktanten i centrifugerøret ofte et subtranslucent, opaliserende udseende (figur 1). Detektering af en åbenlyst brun farve afslører potentiel degranulering af leukocytter, hvilket kan resultere i flydende farvning. Derfor kan farvningsprocessen mislykkes, hvilket gør det nødvendigt enten at plette igen eller indsamle en ny sædprøve til gentest21.
Peroxidase-positive leukocytter viste en brun nuance, der stod i kontrast til de ufarvede almindelige runde celler (figur 2, almindeligt dias). Derefter blev hver spermatozoon og brun leukocyt under det nuværende mikroskopfelt talt, før de skiftede til et helt nyt felt til kontinuerlig observation og optælling. For at sikre optimal nøjagtighed er det nødvendigt at tælle mindst 200 spermatozoer og de leukocytter, der er til stede i det tilsvarende synsfelt.
Figur 1: Reaktantopløsning. Reaktanten, der fuldender reaktionsprocessen, er en subtranslant opaliserende væske. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Observation under optisk mikroskop (almindeligt dias). (A) Peroxidase-positiv leukocyt og (B) almindelig rund celle observeret ved 10 x 40 forstørrelsesoptisk mikroskop. Klik her for at se en større version af denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ortho-toluidin og hydrogenperoxid har lysfølsomme egenskaber og kan nedbrydes, når de udsættes for lys. For at sikre effektiviteten af testreagenserne anbefales det, at den fremstillede arbejdsvæske opbevares på et mørkt sted.
Sædprøver udviser naturligt heterogene egenskaber. I fremstillingsprocessen af sædprøver er korrekt bedømmelse af sædens flydende tilstand og grundig homogenisering af sædprøverne før hver prøveudtagning afgørende for at forbedre testresultaternes pålidelighed. Sædprøver flyder fuldstændigt inden for 15 minutter. Mekanisk homogenisering eller enzymatisk fordøjelse bør overvejes, hvis de ikke er helt flydende efter 60 min. Mere homogene sædprøver kan opnås ved forsigtigt at ryste prøvebeholderen kontinuerligt under fortætningsprocessen ved hjælp af en todimensionel ryster8.
Undersøgelsesmetoden, der præsenteres i dette papir, har fordelene ved enkelhed, hastighed og omkostningseffektivitet. Det kan dog ikke være fordelagtigt under visse omstændigheder: peroxidase opbevares i azurofile granulater, der udskilles i det intercellulære rum gennem degranulering eller cytopempsis ved aktivering21,22. Derfor kan neutrofiler ikke plette og kan ikke identificeres. I sådanne tilfælde bliver det nødvendigt at gentage farvningsprocessen eller endda kræve, at patienten leverer en ny sædprøve til fornyet undersøgelse. For at minimere denne situation anbefales det at bruge friske sædprøver, når det er muligt, med minimal placeringstid og en mild homogeniseringsproces. Denne metode kan kun identificere aktive sygdomme eller infektioner og kan ikke identificere sygdomme i senere stadier, såsom kroniske infektioner16. Derudover udgør andre typer leukocytter med lavere peroxidaseindhold, såsom lymfocytter, makrofager og monocytter, vanskeligheder ved farvning ved hjælp af denne metode; derfor kan opnåelse af pålidelige resultater opnås ved anvendelse af leukocytantigen (fx CD45) immunohistokemisk farvning.
Som krævet i den 5. udgave af WHO-manualen kræver traditionel positiv myeloperoxidasefarvning (Endtz-test) mikroskopisk tælling af mindst 200 peroxidase-positive leukocytter i en blodcelletællingsplade for at beregne deres koncentration8. Sammenlignet med den traditionelle manuelle Endtz-test introducerer denne protokol spermatozokoncentrationsdata opnået ved CASA-detektion, der kombinerer manuelle og automatiske metoder. For at beregne koncentrationen af peroxidase-positive leukocytter blev mindst 200 spermatozoer og leukocytter i det tilsvarende synsfelt talt under et mikroskop. Da koncentrationen af spermatozoer i sæd er meget større end for leukocytter, var der mindre tid til at tælle 200 spermatozoer sammenlignet med at tælle 200 peroxidase-positive leukocytter.
Patienter med svær oligospermi, cryptozoospermia og azoospermi står ofte over for udfordringer med at tælle et tilstrækkeligt antal spermatozoer. I sådanne tilfælde kan koncentrationen af peroxidasepositive leukocytter beregnes direkte ved hjælp af en blodcelletælleplade som beskrevet i manualen til pladen. Derudover kan en blodcelletælleplade også anvendes til at bestemme koncentrationen af peroxidase-positive leukocytter til patienter, der ikke kræver CASA eller laboratorier uden CASA-udstyr.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Forfatterne er taknemmelige for Andrology Laboratory ved Center for Reproduktiv Medicin, det tredje tilknyttede hospital ved Sun Yat-sen University, for at levere faciliteterne til denne undersøgelse. Der var ingen finansiering involveret i udarbejdelsen af denne artikel.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia B |
| 6% (v/v) hydrogen peroxide solution | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia D |
| Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE | Microptic S.L. | 1222996; Model type: SCA-SCOPE-H | Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment |
| Disposable centrifugal tube (1.5 mL) | Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD | 2210009 | Centrifugal tube for Staining process |
| Disposable transfer pipette (3 mL) | Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD | 20221101 | Polymer-based pipette |
| Electronic counter | None | None | A multichannel counter |
| Electronic scales | Shanghai Liangping Instrument Co., LTD | D9008084 | MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g |
| Makler counting chamber | Makler | MQ30004 | 0.01 sq.mm, 10 μm deep |
| Optical microscope | Olympus | 3G41067201307 | CX31, 10×40 |
| Ortho-toluidine substrate solution | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia C |
| Pipet tips(1 mL) | Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd | 02923205 | 1000 tips/unit, 5 units/case |
| Pipet tips(10 µL) | Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd | 00323961 | 1000 tips/unit, 20 units/case |
| Pipet tips(200 µL) | Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd | 32822810 | 1000 tips/unit, 20 units/case |
| Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia A |
| SCA counting chamber | Microptic S.L. | 102230608 | 10 µm, 2 Chambers |
| The container for semen sample | Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD | 20230701 | Polymer-based receptacle for semen sample |
| Thermostatic table | Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD | MQ30004 | MQ-300 |
| Transfer pipette (10 µL) | Eppendoff | 3121000.015 | |
| Transfer pipette (1000 µL) | Eppendoff | 3121000.12 | |
| Transfer pipette (200 µL) | Eppendoff | 3121000.082 | |
| Two-dimensional shaker | DragonLab | 822000010000 | VC5A002205 |
References
- Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. A unique view on male infertility around the globe. Reprod Biol Endocrinol. 13, 37 (2015).
- Sharlip, I. D., et al. Best practice policies for male infertility. Fertil Steril. 77 (5), 873-882 (2002).
- Choy, J. T., Eisenberg, M. L. Male infertility as a window to health. Fertil Steril. 110 (5), 810-814 (2018).
- Pellati, D., et al. Genital tract infections and infertility. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 140 (1), 3-11 (2008).
- Rivero, M. J., Kulkarni, N., Thirumavalavan, N., Ramasamy, R. Evaluation and management of male genital tract infections in the setting of male infertility: an updated review. Curr Opin Urol. 33 (3), 180-186 (2023).
- Long, S., Kenworthy, S. Round cells in diagnostic semen analysis: A guide for laboratories and clinicians. Br J Biomed Sci. 79, 10129 (2022).
- Johanisson, E., Campana, A., Luthi, R., de Agostini, A. Evaluation of 'round cells' in semen analysis: a comparative study. Hum Reprod Update. 6 (4), 404-412 (2000).
- World Health Organization. WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen. 5th edn. World Health Organization. , (2010).
- Domes, T., et al. The incidence and effect of bacteriospermia and elevated seminal leukocytes on semen parameters. Fertil Steril. 97 (5), 1050-1055 (2012).
- Aziz, N., Agarwal, A., Lewis-Jones, I., Sharma, R. K., Thomas, A. J. Novel associations between specific sperm morphological defects and leukocytospermia. Fertil Steril. 82 (3), 621-627 (2004).
- Alahmar, A. T. Role of oxidative stress in male infertility: An updated review. J Hum Reprod Sci. 12 (1), 4-18 (2019).
- Schlegel, P. N., et al. Diagnosis and treatment of infertility in men: AUA/ASRM guideline Part I. J Urol. 205 (1), 36-43 (2021).
- Ricci, G., Presani, G., Guaschino, S., Simeone, R., Perticarari, S. Leukocyte detection in human semen using flow cytometry. Hum Reprod. 15 (6), 1329-1337 (2000).
- Brunner, R. J., Demeter, J. H., Sindhwani, P. Review of guidelines for the evaluation and treatment of leukocytospermia in male infertility. World J Mens Health. 37 (2), 128-137 (2019).
- Amulic, B., Cazalet, C., Hayes, G. L., Metzler, K. D., Zychlinsky, A. Neutrophil function: from mechanisms to disease. Annu Rev Immunol. 30, 459-489 (2012).
- Khan, A. A., Alsahli, M. A., Rahmani, A. H. Myeloperoxidase as an active disease biomarker: recent biochemical and pathological perspectives. Med Sci (Basel). 6 (2), 33 (2018).
- Khan, A. A., Rahmani, A. H., Aldebasi, Y. H., Aly, S. M. Biochemical and pathological studies on peroxidases -an updated review). Glob J Health Sci. 6 (5), 87-98 (2014).
- Liu, W. Q., et al. Myeloperoxidase-derived hypochlorous acid promotes ox-LDL-induced senescence of endothelial cells through a mechanism involving beta-catenin signaling in hyperlipidemia. Biochem Biophys Res Commun. 467 (4), 859-865 (2015).
- Nicholls, S. J., Hazen, S. L.
- Wolff, H. The biologic significance of white blood cells in semen. Fertil Steril. 63 (6), 1143-1157 (1995).
- Chen, Y., Hashiguchi, N., Yip, L., Junger, W. G. Hypertonic saline enhances neutrophil elastase release through activation of P2 and A3 receptors. Am J Physiol Cell Physiol. 290 (4), C1051-C1059 (2006).
- Weiss, S. J.
