lysate الصفيحات الإنسان هو مصدر غني من عوامل النمو وقوية في ملحق ثقافة الخلية. يعرض هذا البروتوكول عملية إعداد مجموعة كبيرة من الصفائح الدموية lysate الإنسان بدءا من البلازما الغنية الصفائح الدموية ، وأداء العديد من تجميد أذاب الدورات واستنزاف شظايا الصفائح الدموية.
وقد تبين أن الصفيحات عوامل النمو المشتقة لتحفيز تكاثر الخلايا بكفاءة<em> في الجسم الحي</em<sup> 1،2</sup> و<em> في المختبر</em>. وقد أبلغ هذا التأثير لخلايا انسجة الوسيطة (MSCS) ، الليفية والخلايا البطانية التي تشكل مع مستعمرة الصفائح تفعيلها من خلال ثرومبين<sup> 3-5</sup> أو بواسطة lysed تجميد / الذوبان دورات<sup> 14/06</sup> قبل إضافة releasate الصفيحات إلى الخلية متوسطة الثقافة. وقد تم بالفعل تأثير التغذية من عوامل النمو المشتقة الصفيحات اختبارها في عدة محاكمات لهندسة الأنسجة والعلاج التجديدي.<sup> 1،15-17</supيعتبر> كفاءة متفاوتة على الأقل في جزء منه نتيجة لتركيزات مختلفة من عوامل نمو فردي<sup> 18،19</sup> والنقص الحالي في بروتوكولات موحدة لإعداد الصفائح الدموية.<sup> 15،16</sup> يعرض هذا البروتوكول إجراء العملية لتوليد مجموعة من الصفائح الدموية lysate الإنسان (pHPL) المستمدة من البلازما التي تنتج عادة غنية الصفيحات (PRP) من 40-50 التبرع بالدم واحد. بواسطة دورات تجميد / الذوبان عدة معطوبة الأغشية والصفائح الدموية يتم الافراج بكفاءة عوامل النمو في البلازما. أخيرا ، تتم إزالة أجزاء الصفائح الدموية عن طريق الطرد المركزي لتجنب تشكيل التجميعية واسعة وتستنزف مستضدات محتملة. تنفيذ pHPL في البروتوكولات القياسية الثقافة تمثل أداة واعدة لمزيد من تطوير علاجات الخلية نشر في البروتين الحيواني خالية من النظام.
ربما في بعض المناطق يمكن الحصول على الصفائح الدموية البلازما الغنية (PRP) من الشهباء ، المعاطف يجري خلاف ذلك مضيعة للمنتج معبأة انتاج خلايا الدم الحمراء من تبرعات الدم اختبار (الشكل 1). على النحو الأمثل ، يتم استخدام PRP على الفور لإعداد المزيد من pHPL ، كما في الصفائح الدمو…
وقد تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة الأبحاث النمساوية (FWF ، منح N211 – NAN إلى DS) وتعزيز البحوث النمساوية وكالة (FFG ، ومنحة لN200 DS). الكتاب نشكر كلوديا رابط للحصول على مساعدة فنية ممتازة وفاريل مونيكا لتحرير اللغوي.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
Water bath | ||||
Sterile scissors | ||||
Clamps | ||||
Centrifuge |