Preparazione del pool lisato piastrinico umani (pHPL) come supplemento efficiente per animali siero-Free Culture sulle cellule staminali umane
Summary
Umano lisato piastrinico è una ricca fonte di fattori di crescita e di un supplemento potente nelle cellule in coltura. Questo protocollo presenta il processo di preparazione di un ampio pool di lisato piastrinico umano partendo da plasma ricco di piastrine, eseguendo numerosi cicli di gelo-disgelo e riducono i frammenti delle piastrine.
Abstract
Fattori di crescita derivato dalle piastrine hanno dimostrato di stimolare la proliferazione cellulare in modo efficiente<em> In vivo</em<sup> 1,2</sup> E<em> In vitro</em>. Questo effetto è stato segnalato per le cellule stromali mesenchimali (MSCs), fibroblasti e endoteliali che formano colonie cellule con piastrine attivate da parte della trombina<sup> 3-5</sup> O lisate da cicli gelo / disgelo<sup> 6-14</sup> Prima del releasate piastrinica è aggiunto al mezzo di coltura cellulare. L'effetto trofico dei fattori di crescita derivato dalle piastrine è già stato testato in studi diversi per l'ingegneria dei tessuti e la terapia rigenerativa.<sup> 1,15-17</supEfficienza> Variando è considerato, almeno in parte a causa di concentrazioni singolarmente divergenti dei fattori di crescita<sup> 18,19</sup> E la mancanza attuale di protocolli standardizzati per la preparazione delle piastrine.<sup> 15,16</sup> Questo protocollo rappresenta una procedura praticabile per generare un pool di risorse umane lisato piastrinico (pHPL) derivati da plasma regolarmente prodotto ricco di piastrine (PRP) del 40-50 donazioni di sangue singolo. Da diversi cicli gelo / disgelo le membrane delle piastrine sono danneggiati e fattori di crescita sono efficacemente rilasciati nel plasma. Infine, i frammenti delle piastrine vengono rimossi mediante centrifugazione per evitare la formazione di ampi aggregati e impoveriscono gli antigeni potenziale. L'attuazione di pHPL in protocolli standard di cultura rappresenta uno strumento promettente per l'ulteriore sviluppo di terapie cellulari propagato in un animale privo di proteine del sistema.
Protocol
Discussion
In alcune regioni plasma ricco di piastrine (PRP) possono essere ottenuti da buffy-coat altrimenti essendo un prodotto di scarto della confezionato produzione di globuli rossi da donazioni di sangue testato (Figura 1). In modo ottimale, PRP viene utilizzata immediatamente per l'ulteriore preparazione di pHPL, come in piastrine superata concentra la disponibilità di fattori di crescita può essere ridotta a causa di lesioni di stoccaggio delle piastrine e la degradazione 20. Si raccomanda inoltre di produ…
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Fondazione per la ricerca austriaco (FWF, concedere N211-NAN per DS) e l'Agenzia austriaca per la promozione della ricerca (FFG, concedere N200 a DS). Gli autori ringraziano URL Claudia per un'eccellente assistenza tecnica e Monica Farrell per la modifica linguistica.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
| 50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
| Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
| Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
| Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
| Water bath | ||||
| Sterile scissors | ||||
| Clamps | ||||
| Centrifuge |
Riferimenti
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