Preparação de pool de plaquetas Lysate Humanos (pHPL) como um suplemento eficiente para animais de soro livre de culturas de células estaminais humanas
Summary
Lisado de plaquetas humanas é uma fonte rica em fatores de crescimento e um suplemento potente em cultura de células. Este protocolo apresenta o processo de preparação de um grande pool de lisado de plaquetas humanas por a partir de plasma rico em plaquetas, realizando diversos ciclos de congelamento e descongelamento e esgotando os fragmentos de plaquetas.
Abstract
Fatores de crescimento plaquetário derivados têm sido mostrados para estimular a proliferação celular de forma eficiente<em> In vivo</em<sup> 1,2</sup> E<em> In vitro</em>. Este efeito tem sido relatada para células mesenquimais estromais (MSCs), fibroblastos e endoteliais formadoras de colônias de células com plaquetas ativadas por trombina<sup> 05/03</sup> Ou lisadas por congelamento / descongelamento<sup> 14/06</sup> Antes do releasate plaquetas é adicionado ao meio de cultura celular. O efeito trófico de fatores de crescimento plaquetário derivados já foi testada em vários ensaios para a engenharia de tecidos e terapia regenerativa.<sup> 1,15-17</sup> Eficiência Variar é considerada pelo menos em parte devido às concentrações individualmente divergentes de fatores de crescimento<sup> 18,19</sup> E um actual falta de protocolos padronizados para a preparação de plaquetas.<sup> 15,16</sup> Este protocolo apresenta um procedimento viável para gerar um pool de lisado de plaquetas humanas (pHPL) derivados do plasma produzido rotineiramente rico em plaquetas (PRP) de 40-50 doações de sangue única. Por vários congelamento / descongelamento das membranas de plaquetas estão danificados e fatores de crescimento são eficientemente liberado no plasma. Finalmente, os fragmentos de plaquetas são removidos por centrifugação, para evitar a formação de agregados extensa e destroem antígenos em potencial. A implementação de protocolos em pHPL cultura padrão representa uma ferramenta promissora para o desenvolvimento de terapêuticas de células propagadas em um animal livre de proteína do sistema.
Protocol
Discussion
Em algumas regiões de plaquetas plasma rico (PRP) podem ser obtidas buffy-coats de outra forma de ser um produto embalado resíduos de produção de glóbulos vermelhos a partir de doações de sangue testadas (Figura 1). Idealmente, PRP é usado imediatamente para melhor preparação de pHPL, como em plaquetas desatualizado concentra a disponibilidade de fatores de crescimento pode ser reduzido devido a lesões de armazenamento de plaquetas e degradação 20. Recomenda-se ainda para produzir PRP combinando …
Acknowledgements
Este trabalho tem sido apoiada pelo austríaco Research Foundation (FWF, conceder N211-NAN para DS) ea Agência de Promoção Austrian Research (FFG, conceder N200 para DS). Os autores agradecem a Claudia Url para assistência técnica excelente e Farrell Monica para a edição de linguística.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
| 50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
| Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
| Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
| Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
| Water bath | ||||
| Sterile scissors | ||||
| Clamps | ||||
| Centrifuge |
Riferimenti
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