動物の無血清ヒト幹細胞培養のための効率的なサプリメントとしてプールしたヒト血小板可溶化物（pHPL）の調製
Summary
ヒト血小板溶解液は、増殖因子や細胞培養における強力なサプリメントの豊富な情報源となります。このプロトコルは、多血小板血漿から始まるいくつかの凍結融解サイクルを実行し、血小板の断片を枯渇させることによってヒト血小板溶解物の大規模なプールを準備するプロセスを示します。
Abstract
血小板由来増殖因子が効率的に細胞増殖を刺激することが示されている<em> in vivoで</em<sup> 1,2</sup>と<em> in vitroで</em>。この効果は、トロンビンにより活性化血小板との間葉系幹細胞（MSCs）、線維芽細胞および内皮コロニー形成細胞について報告されている<sup> 3月5日</sup>または凍結/解凍サイクルによって溶解<sup> 6月14日</sup>血小板releasate前に、細胞培養の培地に添加される。血小板由来増殖因子の栄養効果は、既に組織工学と再生医療のためにいくつかの試験で検証されています。<sup> 1,15-17</sup>可変効率が原因で成長因子の個々に分岐濃度に少なくとも部分的にあると考えられている<sup> 18,19</sup>と血小板調製のための標準化されたプロトコルの現在の不足。<sup> 15,16</sup>このプロトコルは、四十から五十単一の献血の日常的に生成される多血小板血漿（PRP）に由来するヒト血小板溶解液（pHPL）のプールを生成するための実用的な手順を示します。いくつかの凍結/解凍サイクルによる血小板膜が破損しているため、成長因子を効率的に血漿中に放出されています。最後に、血小板の断片は、広範な凝集体形成を回避し、潜在的な抗原を除去するために遠心分離により除去されています。標準培養プロトコルにpHPLの実装では、タンパク質を含まない系動物に伝播する細胞治療薬のさらなる発展のための有望なツールを表します。
Protocol
1。出発材料 cytapheresisによって準備または軟膜から派生した多血小板血漿（PRP）の単位で始まります。 2。無菌性のチェック不妊のために接続されている小さな袋（バクスター）にボリュームを転送することにより、各PRPのユニットから20 mLのサンプルを取るチェック。溶接することで、このバッグを外します。 …
Discussion
一部の地域では多血小板血漿（PRP）はバフィー-コートは、特にテストされた献血（図1）から濃厚赤血球の生産の廃棄物であることから得ることができる。成長因子の可用性を集中する時代遅れの血小板のように最適に、PRPは、pHPLのさらなる準備のためにすぐに使用されています血小板ストレージの病変と劣化は20〜のために少なくなります。さらに、ABH抗原とisoagglutininsの可能な影?…
Acknowledgements
この作品は、オーストリアの研究財団（FWF、DSへの助成金N211 – NAN）とオーストリアの研究推進機構（FFG、DSへの助成金N200）によってサポートされています。著者は、言語編集用の優れた技術支援とモニカファレルのためクラウディアURLを感謝。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
| 50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
| Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
| Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
| Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
| Water bath | ||||
| Sterile scissors | ||||
| Clamps | ||||
| Centrifuge |
Riferimenti
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Citazione di questo articolo
Schallmoser, K., Strunk, D. Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures. J. Vis. Exp. (32), e1523, doi:10.3791/1523 (2009).