Hayvan Serum Ücretsiz İnsan Kök Hücre Kültürleri Verimli Ek olarak Pooled İnsan Trombosit Lizat (pHPL) hazırlanması
Summary
İnsan trombosit lizat, büyüme faktörleri ve hücre kültüründe güçlü bir ek zengin bir kaynak. Bu protokol, zengin plazma, trombosit başlayarak, çeşitli donma-çözülme döngüsünden performans ve trombosit parçaları tüketen insan trombosit lizat büyük bir havuz hazırlama süreci sunar.
Abstract
Trombosit kökenli büyüme faktörleri verimli hücre çoğalması teşvik gösterilmiştir.<em> In vivo</em<sup> 1,2</sup> Ve<em> In vitro</em>. Bu etki, trombin tarafından aktive trombositler, mezenkimal stromal hücreler (MKH), fibroblastlar ve endotel koloni oluşturan hücrelerin bildirilmiştir<sup> 3-5</sup> Veya donma / çözülme döngüsü tarafından parçalanan<sup> 6-14</sup> Önce trombosit releasate hücre kültür ortamına eklenir. Trombosit kaynaklı büyüme faktörleri trofik etkisi zaten doku mühendisliği ve rejeneratif tedavi için çeşitli çalışmalarda test edilmiştir.<sup> 1,15-17</sup> Değişen verimlilik, büyüme faktörleri ayrı ayrı birbirinden farklı konsantrasyonları nedeniyle en azından bir kısmını olarak kabul edilir<sup> 18,19</sup> Ve trombosit hazırlanması için standart protokoller geçerli bir eksikliği.<sup> 15,16</sup> Bu protokol, 40-50 tek bir kan bağış rutin trombosit zengin plazma (TZP) türetilen insan trombosit lizatı (pHPL) bir havuz oluşturmak için uygulanabilir bir prosedür sunmaktadır. Birkaç donma / çözülme çevrimleri ile trombosit zarı zarar ve büyüme faktörleri plazma verimli bir şekilde salınır. Son olarak, trombosit parçaları geniş toplam oluşumunu önlemek ve potansiyel antijenleri tüketmek için santrifüj kaldırılır. PHPL standart kültür protokolleri uygulanması, bir hayvan proteini-free sistemi yayılan hücre terapötikler daha da geliştirilmesi için umut vaat eden bir aracı temsil eder.
Protocol
Discussion
Bazı bölgelerde trombosit zengin plazma (TZP) buffy-kat olarak test edilmiş kan bağışı (Şekil 1) paketlenmiş kırmızı kan hücresi üretimi bir atık ürün elde edilebilir. Optimal, büyüme faktörleri durumu konsantreleri eskimiş trombosit gibi, PRP, hemen pHPL daha fazla hazırlanması için kullanılır trombosit saklama lezyonlar ve 20 bozulması nedeniyle azalabilir . AİHM, ayrıca, ABH antijenleri ve isoagglutinins olası etkileri önlemek için, O kan grubu AB kan grubunda plazma ile tro…
Acknowledgements
Bu çalışma, Avusturya Araştırma Vakfı (FWF, DS hibe N211-NAN) ve Avusturya Araştırma Promosyon Ajansı (FFG, hibe N200 DS) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, dil düzenleme için mükemmel teknik yardım ve Monica Farrell Claudia URL teşekkür ederim.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
| 50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
| Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
| Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
| Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
| Water bath | ||||
| Sterile scissors | ||||
| Clamps | ||||
| Centrifuge |
Riferimenti
- Nurden, A. T., Nurden, P., Sanchez, M., Andia, I., Anitua, E. Platelets and wound healing. Front Biosci. 13, 3532-3548 (2008).
- Barrientos, S., Stojadinovic, O., Golinko, M. S., Brem, H., Tomic-Canic, M. Growth factors and cytokines in wound healing. Wound Repair Regen. 16, 585-601 (2008).
- Giacco, F. Thrombin-activated platelets induce proliferation of human skin fibroblasts by stimulating autocrine production of insulin-like growth factor-1. FASEB J. 20, 2402-2404 (2006).
- Kocaoemer, A., Kern, S., Kluter, H., Bieback, K. Human AB serum and thrombin-activated platelet-rich plasma are suitable alternatives to fetal calf serum for the expansion of mesenchymal stem cells from adipose tissue. Stem Cells. 25, 1270-1278 (2007).
- Kakudo, N. Proliferation-promoting effect of platelet-rich plasma on human adipose-derived stem cells and human dermal fibroblasts. Plast Reconstr Surg. 122, 1352-1360 (2008).
- Doucet, C. Platelet lysates promote mesenchymal stem cell expansion: A safety substitute for animal serum in cell-based therapy applications. J Cell Physiol. 205, 228-236 (2005).
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Schallmoser, K. Rapid large-scale expansion of functional mesenchymal stem cells from unmanipulated bone marrow without animal serum Tissue Eng Part. C Methods. 14, 185-196 (2008).
- Lange, C. Accelerated and safe expansion of human mesenchymal stromal cells in animal serum-free medium for transplantation and regenerative medicine. J Cell Physiol. 213, 18-26 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Bernardo, M. E. Optimization of in vitro expansion of human multipotent mesenchymal stromal cells for cell-therapy approaches: further insights in the search for a fetal calf serum substitute. J Cell Physiol. 211, 121-130 (2007).
- Carrancio, S. Optimization of mesenchymal stem cell expansion procedures by cell separation and culture conditions modification. Exp Hematol. 36, 1014-1021 (2008).
- Muller, A. M. Platelet lysate as a serum substitute for 2D static and 3D perfusion culture of stromal vascular fraction cells from human adipose tissue. Tissue Eng Part A. 15, 869-875 (2009).
- Anitua, E., Sanchez, M., Orive, G., Andia, I. The potential impact of the preparation rich in growth factors (PRGF) in different medical fields. Biomaterials. 28, 4551-4560 (2007).
- Anitua, E. New insights into and novel applications for platelet-rich fibrin therapies. Trends Biotechnol. 24, 227-234 (2006).
- Martinez-Zapata, M. J. Efficacy and safety of the use of autologous plasma rich in platelets for tissue regeneration: a systematic review. Transfusion. 49, 44-56 (2009).
- Weibrich, G., Kleis, W. K., Hafner, G., Hitzler, W. E. Growth factor levels in platelet-rich plasma and correlations with donor age, sex, and platelet count. J Craniomaxillofac Surg. 30, 97-102 (2002).
- Frechette, J. P., Martineau, I. &. a. m. p. ;. a. m. p., Gagnon, G. Platelet-rich plasmas: growth factor content and roles in wound healing. J Dent Res. 84, 434-439 (2005).
- Seghatchian, J., Krailadsiri, P. The platelet storage lesion. Transfus Med Rev. 11, 130-144 (1997).
- Selvaggi, T. A., Walker, R. E., Fleisher, T. A. Development of antibodies to fetal calf serum with arthus-like reactions in human immunodeficiency virus-infected patients given syngeneic lymphocyte infusions. Blood. 89, 776-779 (1997).
- Tonti, G. A., Mannello, F. From bone marrow to therapeutic applications: different behaviour and genetic/epigenetic stability during mesenchymal stem cell expansion in autologous and foetal bovine sera. Int J Dev Biol. 52, 1023-1032 (2008).
- Bieback, K. Human Alternatives to Fetal Bovine Serum for the Expansion of Mesenchymal Stromal Cells from Bone Marrow. Stem Cells. , (2009).
- Rohde, E., Schallmoser, K., Bartmann, C., Reinisch, A., Gad, S. C. GMP-Compliant Propagation of Human Multipotent Mesenchymal Stromal Cells. Pharmaceutical Manufacturing Handbook: Regulations and Quality. , 97-115 (2008).
