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सुपीरियर मेसेंटेरिक धमनी के रोड़ा के माध्यम से आंतों के इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट का कृंतक मॉडल

Published: October 20, 2023 doi: 10.3791/64314
Automatic Translation
1,2, 1, 1, 3
1Animal Surgery and Resources Core, National Heart, Lung, and Blood Institute, National Institutes of Health, 2College of Veterinary Medicine, Mississippi State University, 3Division of Veterinary Resources, Office of Research Services, National Institutes of Health

Summary

हम वर्णन करते हैं कि कृन्तकों में आंतों के इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट (आईआरआई) का व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला सर्जिकल मॉडल कैसे उत्पन्न किया जाए। प्रक्रिया में रक्त प्रवाह की बहाली के बाद बेहतर मेसेंटेरिक धमनी का रोड़ा शामिल है। यह मॉडल पशु चिकित्सा और मानव चिकित्सा दोनों में आंतों के आईआरआई के रोड़ा कारणों की जांच के अध्ययन के लिए उपयोगी है।

Abstract

आंतों के इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट (आईआरआई) पशु चिकित्सा और मानव चिकित्सा दोनों में स्थितियों के असंख्य के साथ जुड़ा हुआ है। आंतों की आईआरआई स्थितियां, जैसे गैस्ट्रिक फैलाव वॉल्वुलस (जीडीवी), मेसेंटेरिक मरोड़ और शूल, कुत्तों और घोड़ों जैसे जानवरों में देखी जाती हैं। रक्त प्रवाह के प्रारंभिक रुकावट के कारण ऊतक इस्केमिक हो जाते हैं। हालांकि व्यवहार्य ऊतक को उबारने के लिए आवश्यक है, बाद में reperfusion आगे की चोट को प्रेरित कर सकता है। आईआरआई के लिए जिम्मेदार मुख्य तंत्र क्षतिग्रस्त ऊतक में ऑक्सीजन के पुनरुत्पादन और पुनरुत्पादन पर मुक्त कट्टरपंथी गठन है, लेकिन इसमें कई अन्य घटक शामिल हैं। परिणामी स्थानीय और प्रणालीगत प्रभाव अक्सर एक खराब पूर्वानुमान प्रदान करते हैं।

आंतों आईआरआई पिछले 50 वर्षों में व्यापक शोध का विषय रहा है। एक विवो कृंतक मॉडल में जिसमें बेहतर मेसेंटेरिक धमनी (एसएमए) का आधार अस्थायी रूप से लिगेट किया जाता है, वर्तमान में आंतों के आईआरआई का अध्ययन करने के लिए उपयोग की जाने वाली सबसे आम विधि है। यहां, हम 21% ओ2 चिकित्सा हवा में आइसोफ्लुरेन संज्ञाहरण का उपयोग करके आंतों के आईआरआई के एक मॉडल का वर्णन करते हैं जो प्रजनन योग्य चोट पैदा करता है, जैसा कि छोटी आंतों के लगातार हिस्टोपैथोलॉजी द्वारा प्रदर्शित किया गया है। बृहदान्त्र, यकृत और गुर्दे में ऊतक की चोट का भी आकलन किया गया था।

Introduction

इस्केमिया-रीपरफ्यूजन चोट (आईआरआई) किसी भी अंग में हो सकती है और इसमें दो अनुक्रमिक घटक शामिल होते हैं। रक्त प्रवाह की प्रारंभिक समाप्ति प्रभावित ऊतकों को इस्केमिक बनने का कारण बनती है और फिर बाद में reperfusion आगे सेल की चोट को प्रेरित करता है। reperfusion से नुकसान अक्सर ischemia1 के कारण होता है कि अधिक है. आईआरआई के पैथोफिज़ियोलॉजी में घटनाओं का एक जटिल झरना शामिल है, जिनमें से सबसे उल्लेखनीय ऑक्सीजन के पुनरुत्पादन पर मुक्त कट्टरपंथी गठन है, जो रिपरफ्यूजन2 के दौरान होता है। भड़काऊ कोशिकाओं और साइटोकिन्स की सक्रियता भी एक भूमिका निभातीहै 2. आंतों के आईआरआई के मामलों में, एंडोथेलियल क्षति के बाद रक्तप्रवाह में जीवाणु स्थानांतरण प्रणालीगत भड़काऊ प्रतिक्रिया सिंड्रोम2 का कारण बन सकता है। यदि आईआरआई के कारण क्षति काफी गंभीर है, तो परिणामी प्रणालीगत प्रभाव बहु-अंग विफलता का कारण बन सकतेहैं।

आंतों आईआरआई के मामलों उच्च रुग्णता और मृत्यु दर 4,5,6 के साथ जुड़े रहे हैं. आंतों का आईआरआई पशु चिकित्सा और मानव चिकित्सा दोनों में कई रोग स्थितियों और शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं से जुड़ा हुआ है। पशु चिकित्सा में, जानवरों को विशेष रूप से आंतों आईआरआई स्थितियों, जैसे गैस्ट्रिक फैलाव वॉल्वुलस (जीडीवी), मेसेंटेरिक मरोड़, और शूल 7,8 से ग्रस्त हैं। मनुष्यों में, आईआरआई पेट महाधमनी धमनीविस्फार सर्जरी, गला घोंटने वाले हर्निया, तीव्र मेसेंटेरिक इस्किमिया, वॉल्वुलस, आघात, सदमे, नवजात नेक्रोटाइज़िंग एंटरोकोलाइटिस, और छोटे आंत्र लकीर या प्रत्यारोपण9 में एक प्रमुख और अक्सर होने वाली समस्या है।

आंतों आईआरआई के विवो कृंतक अध्ययन में अधिकांश बेहतर मेसेंटेरिक धमनी (एसएमए) के आधार का रोड़ा शामिल है, उदर महाधमनी की शाखा जो छोटी आंतों के बहुमत और बड़ी आंतों के समीपस्थ भाग 10,11,12को रक्त की आपूर्ति करती है। इस मॉडल के व्यापक उपयोग और सापेक्ष सादगी के बावजूद, 21% ओ2 चिकित्सा हवा में इनहेलेंट संज्ञाहरण का उपयोग करके एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रकाशित नहीं किया गया है। एक मानक प्रोटोकॉल की कमी उन शोधकर्ताओं के लिए कठिनाई पैदा करती है जो प्रक्रिया से अपरिचित हैं और अध्ययनों में स्थिरता को रोकते हैं। हम 8-14 सप्ताह के पुरुष और महिला स्विस वेबस्टर चूहों में आंतों आईआरआई के सर्जिकल मॉडल का संचालन करने के लिए आवश्यक चरणों का प्रदर्शन करते हैं। आंतों के आईआरआई का यह मॉडल प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य चोट पैदा करता है, जैसा कि लगातार हिस्टोपैथोलॉजी द्वारा प्रदर्शित किया गया है।

Protocol

यहां वर्णित प्रक्रियाओं को राष्ट्रीय हृदय, फेफड़े और रक्त संस्थान पशु देखभाल और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान में पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और मानवीय देखभाल और प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग पर सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा नीति में उल्लिखित नीतियों के अनुरूप है, पशु कल्याण अधिनियम, और प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड।

1. सर्जिकल सेटअप

  1. सड़न रोकनेवाला प्रक्रियाओं का पालन करें। एक मास्क, हेयर कवर और साफ जंपसूट/लैब कोट/सर्जिकल स्क्रब पहनें।
  2. निम्नलिखित निष्फल सामग्री तैयार करें: सर्जिकल उपकरण ( सामग्री की तालिकादेखें), गर्म खारा, कपास झाड़ू, धुंध, सर्जिकल स्टेपल, सर्जिकल पर्दे और दस्ताने। सर्जिकल टेप भी प्राप्त करें, जिसे निष्फल करने की आवश्यकता नहीं है। आटोक्लेव या एथिलीन ऑक्साइड नसबंदी तकनीक के साथ सामग्री को स्टरलाइज़ करें।
  3. सर्जरी क्षेत्र में एक गर्म परिसंचारी पानी कंबल रखें और इसे एक बाँझ तौलिया या ड्रेप के साथ कवर करें।
  4. सर्जिकल एनेस्थीसिया प्रदान करने के लिए चूहों के लिए डिज़ाइन किए गए नाक शंकु के साथ एक सटीक आइसोफ्लुरेन वेपोराइज़र, दबाव वाली चिकित्सा हवा (21% ओ2), और एक बैन गैर-रिब्रीदिंग सर्किट का उपयोग करें।

2. पशु तैयारी

  1. चैम्बर वॉल्यूम के प्रत्येक लीटर के लिए 0.5 एल/मिनट की दर से 21% ओ2 मेडिकल एयर के साथ 2% -4% आइसोफ्लुरेन वितरित करके एक प्रेरण कक्ष में माउस को एनेस्थेटाइज करें।
    नोट: इस विशेष मॉडल के लिए 100% ओ2 पर 21% ओ2 चिकित्सा हवा का उपयोग करना बेहतर होता है, क्योंकि ओ2 के साथ रक्त को संतृप्त करना आईआरआई में हस्तक्षेप कर सकता है।
  2. कक्ष से माउस निकालें और यह सर्जरी क्षेत्र से अलग एक साफ सतह पर ले जाएँ. इसे नाक शंकु के साथ फिट करें जो 21% ओ2 चिकित्सा हवा के साथ 1.5% आइसोफ्लुरेन वितरित करता है।
  3. पृष्ठीय गर्भाशय ग्रीवा थोरेसिक क्षेत्र में चमड़े के नीचे 1 मिलीग्राम / किग्रा ब्यूप्रेनोर्फिन इंजेक्ट करें।
  4. रोड़ा की अवधि के दौरान थ्रोम्बस गठन को रोकने के लिए 200-600 आईयू/किग्रा हेपरिन इंट्रापेरिटोनली इंजेक्ट करें।
  5. कॉर्नियल क्षति को रोकने के लिए आंखों पर नेत्र मरहम लागू करें।
  6. कतरनी का उपयोग कर उदर पेट से बाल निकालें.
  7. सर्जरी क्षेत्र में गर्म पानी कंबल पर माउस ले जाएँ. फिर से, संज्ञाहरण के सर्जिकल विमान को प्राप्त करने के लिए 21% ओ2 चिकित्सा हवा के साथ 1.5% आइसोफ्लुरेन देने वाले नाक शंकु के साथ इसे फिट करें।
  8. पृष्ठीय recumbency में माउस की स्थिति और सर्जिकल टेप के साथ मेज पर अंगों को सुरक्षित.
  9. एक कृंतक विशिष्ट थर्मामीटर का उपयोग कर जानवर के शरीर के तापमान की निगरानी करें. सर्जरी की पूरी अवधि के लिए शरीर का तापमान 36.5 ± 0.5 डिग्री सेल्सियस रखें।
  10. क्लोरहेक्सिडिन स्क्रब या पोविडोन-आयोडीन स्क्रब में भिगोए गए बाँझ धुंध का उपयोग करके उदर पेट कीटाणुरहित करें, इसके बाद 70% अल्कोहल। इस क्रम को तीन बार दोहराएं, स्क्रब और अल्कोहल के बीच बारी-बारी से। हर बार स्क्रब और अल्कोहल गॉज का एक नया सेट इस्तेमाल किया जाना चाहिए।
    1. एक परिपत्र गति में स्क्रब और अल्कोहल लागू करें, सर्जिकल साइट के केंद्र में छोटे हलकों से शुरू करें और धीरे-धीरे हलकों के आकार को बढ़ाकर किनारों की ओर काम करें। सर्जिकल साइट के किनारे तक पहुंचने के बाद धुंध को त्यागें। किनारे से केंद्र तक पीछे की ओर स्क्रब न करें।
  11. पशु पूरी तरह से संवेदनाहारी है सुनिश्चित करने के लिए एक पैर की अंगुली चुटकी परीक्षण (पेडल पलटा) प्रदर्शन.
  12. बाँझ दस्ताने पहनें। Aseptically शल्य साइट ड्रेप.

3. सर्जरी और इस्किमिया

  1. एक # 15 स्केलपेल ब्लेड का उपयोग कर त्वचा में एक 3-5 सेमी उदर midline पेट चीरा बनाओ, यह अंतर्निहित मांसपेशी प्रावरणी से मुक्त काटना, और यह पार्श्व प्रतिबिंबित. सूक्ष्म विदारक कैंची या वसंत भरी हुई माइक्रो कैंची का उपयोग कर लाइनिया अल्बा के साथ पेट की दीवार के माध्यम से चीरा जारी रखें और स्थिति में एक प्रतिकर्षक जगह है.
  2. बाँझ धुंध पैड ऑपरेटिंग क्षेत्र के आसपास गर्म बाँझ खारा के साथ सिक्त रखें।
  3. उदर गुहा से छोटी आंत निकालें, यह cranially और जानवर के बाईं ओर फ्लिप, और सिक्त पैड पर जगह. ऊतकों पर एक और सिक्त धुंध पैड रखें desiccation को रोकने के लिए. समय-समय पर ऊतकों को नम रखने के लिए धुंध पर गर्म बाँझ खारा ड्रिप करें।
  4. एसएमए को अलग करें, जो अवर वेना कावा के लिए उदर स्थित है, सीलिएक धमनी के लिए दुम, और गुर्दे की धमनी के लिए कपाल।
    नोट: चित्रा 1 एसएमए का स्थान दिखाता है जहां इसे सर्जरी के दौरान अलग किया जाता है। एसएमए आम तौर पर अवर वेना कावा के लिए उदर होता है और दाईं ओर फैलता है। जब आंतों को बाहरी किया जाता है और सर्जरी के दौरान बाईं ओर फ़्लिप किया जाता है, तो एसएमए अवर वेना कावा के बाईं ओर स्थित होता है।
  5. एसएमए के आधार पर एक एट्रूमैटिक माइक्रोवास्कुलर क्लिप रखें जहां यह पेट की महाधमनी से शाखाएं करता है, यह सुनिश्चित करता है कि क्लिप बेहतर मेसेंटेरिक नस को बंद नहीं करता है।
  6. गुलाबी से पीले-सफेद रंग में परिवर्तन और मेसेंटेरिक स्पंदन के नुकसान को ध्यान में रखते हुए छोटी आंत के इस्किमिया को सत्यापित करें।
  7. इस्केमिक अवधि की अवधि के लिए आंत को पेट की गुहा के अंदर अपनी मूल स्थिति में लौटाएं। रिट्रैक्टर निकालें और नम धुंध के साथ चीरा कवर. समय-समय पर desiccation को रोकने और शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए धुंध में गर्म बाँझ खारा जोड़ें।
  8. इस्किमिया की एक 45 मिनट की अवधि के बाद (जिसकी शुरुआत क्लिप के प्रारंभिक आवेदन द्वारा चिह्नित है), रोड़ा क्लिप को हटा दें। एक mesenteric धड़कन और निस्तब्ध रंग देख कर रक्त प्रवाह की बहाली की जाँच करें.
  9. उचित जलयोजन बनाए रखने के लिए अंतिम बंद होने से ठीक पहले गर्म बाँझ खारा इंट्रापेरिटोनली लागू करें।
  10. पेट की मांसपेशियों को 6-0 पॉलीग्लैक्टिन 910 सिवनी के साथ बंद करें। दर्द से राहत के लिए मांसपेशियों की चीरा लाइन के साथ बुपीवाकेन (2 मिलीग्राम / किग्रा तक) का प्रशासन करें। सर्जिकल स्टेपल या घाव क्लिप के साथ त्वचा को बंद करें।

4. वसूली और reperfusion

  1. एक परिसंचारी पानी कंबल, हाथ गर्म, या अन्य उपयुक्त गर्मी स्रोत पर एक गर्म कक्ष या पिंजरे के लिए माउस लौटें. चैम्बर वॉल्यूम के प्रत्येक लीटर के लिए 0.5 एल/मिनट की प्रवाह दर पर 21% ओ2 वितरित करें। माउस 90 मिनट के लिए यहाँ ठीक हो जाते हैं. दर्द या संकट के संकेत के लिए हर 5-10 मिनट माउस की निगरानी करें, जैसे कि कूबड़ वाली मुद्रा, भेंगापन, और स्थानांतरित करने की अनिच्छा।

5. इच्छामृत्यु और रक्त संग्रह

  1. 90 मिनट वसूली अवधि के अंत में, प्रेरण कक्ष के लिए माउस वापसी और 2% -4% isoflurane 21% ओ2 के साथ 0.5 एल / मिनट कक्ष मात्रा की दर से पूर्ण संज्ञाहरण फिर से प्रेरित करने के लिए उद्धार.
  2. पशु को सर्जरी क्षेत्र में वापस स्थानांतरित करें और इसे नाक शंकु के साथ फिट करें, गहरी संज्ञाहरण प्राप्त करने के लिए 21% ओ2 के साथ 2% -4% आइसोफ्लुरेन वितरित करें।
    नोट: सीओ2 इस प्रक्रिया के लिए इच्छामृत्यु का एक उपयुक्त तरीका नहीं है, क्योंकि यह शारीरिक परिवर्तनों को प्रेरित करता है जो इस्केमिक चोट या ऊतकविश्लेषण 13 में हस्तक्षेप कर सकते हैं।
  3. उदर midline चीरा फिर से खोलने और एक 23 जी सुई और सिरिंज का उपयोग पेट vena कावा से संभव के रूप में ज्यादा रक्त इकट्ठा करके एक टर्मिनल खून बह रहा प्रदर्शन. 0.3-0.5 एमएल रक्त के बीच इकट्ठा करने की अपेक्षा करें (आईआरआई से गुजरने वाले चूहों में कम, शम लैपरोटॉमी प्राप्त करने वालों में अधिक)।
    नोट: टर्मिनल ब्लीड का उद्देश्य मानवीय इच्छामृत्यु में सहायता करना और भविष्य के परीक्षण (यानी, सीरम रसायन विज्ञान, पीसीआर, एलिसा) के लिए रक्त एकत्र करना और संरक्षित करना है।
  4. रक्त संग्रह के बाद, पेट की महाधमनी को पूर्ण निष्कासन की अनुमति देने के लिए अलग कर दिया जाता है।
  5. सफल इच्छामृत्यु सुनिश्चित करने के लिए एक माध्यमिक उपाय के रूप में या तो गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था या थोरैकोटॉमी करें।

6. ऊतक विज्ञान के लिए ऊतक प्रसंस्करण

  1. इच्छामृत्यु के बाद, वांछित ऊतकों को इकट्ठा करें। सुनिश्चित करें कि ऊतक प्रसंस्करण तुरंत किया जाता है, के रूप में स्वलिसिसतुरंत 14,15 मृत्यु के बाद शुरू होता है.
    1. आंतों: छोटी आंत और बड़ी आंत की पूरी लंबाई इकट्ठा करें। सीकुम को त्यागें।
    2. जिगर: बाएं पार्श्व, बाएं माध्यिका, और दाएं मध्य लोब इकट्ठा करें।
    3. गुर्दे: दोनों गुर्दे ले लीजिए। सम्मेलन द्वारा, बाएं गुर्दे को अनुदैर्ध्य रूप से काटा जाता है, और दाएं को नेक्रोप्सी के समय एक क्रॉस सेक्शन के रूप में काटा जाता है।
      नोट: बृहदान्त्र, यकृत, और गुर्दे बहु अंग विफलता या आईआरआई के अन्य प्रणालीगत प्रभाव का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. प्राथमिक चोट का आकलन करने के लिए छोटी आंतों का उपयोग किया जाता है। यकृत लोब और गुर्दे के अलग-अलग वर्गों का ट्रैक रखना आवश्यक नहीं है, क्योंकि प्रत्येक अंग का विश्लेषण किया जाएगा और एक इकाई के रूप में स्कोर किया जाएगा। हालांकि, आंतों के खंडों को अलग रखा जाना चाहिए और फिर व्यक्तिगत रूप से लेबल और स्कोर किया जाना चाहिए।
  2. आंत को चार वर्गों में विभाजित करें: ग्रहणी, जेजुनम, इलियम और बृहदान्त्र। सुनिश्चित करें कि तीन छोटे आंतों के खंड लंबाई में बराबर हैं। छोटी आंतों को "जेड" आकार में मोड़कर ऐसा करें, जहां शीर्ष रेखा ग्रहणी है, मध्य रेखा जेजुनम है, और नीचे की रेखा इलियम है। समीपस्थ बनाम बाहर का अंत का ट्रैक रखना महत्वपूर्ण है.
  3. एक 20 जी एंजियो-कैथेटर के साथ चिपका एक 10 एमएल सिरिंज का उपयोग खारा के साथ आंतों के खंडों के लुमेन फ्लश.
  4. वर्गों बनाने से पहले, प्रत्येक आंतों खंड फ्लैट ल्यूमिनल पक्ष का सामना करना पड़ के साथ रखना. एक 3 एमएल सिरिंज का उपयोग एक 27 जी सुई के साथ चिपका और उदारता से म्यूकोसा की पूरी लंबाई कोट करने के लिए 10% बफर फॉर्मेलिन ड्रॉपवाइज लागू करते हैं। फिर, प्रत्येक आंतों के खंड को अलग-अलग रोल करें और अलग, लेबल ऊतक कैसेट में रखें।
    1. रोल करने के लिए, प्रत्येक खंड को ल्यूमिनल साइड के साथ फ्लैट रखें, फिर टूथपिक के चारों ओर परिधि से रोल करें। समीपस्थ भाग को रोल के आंतरिक भाग का निर्माण करना चाहिए। लुमेन का मुख अंदर/केंद्र की ओर होना चाहिए। विली को संपीड़ित करने से बचने के लिए जितना संभव हो उतना धीरे से रोल करने की कोशिश करें।
    2. जब लुढ़का हुआ होता है, तो आंत को स्विस रोल की तरह दिखना चाहिए। स्विस रोल सर्पिल फेस-अप को कैसेट के अंदर रखें।
  5. ऊतकों को कमरे के तापमान पर ठीक करने के लिए 10% बफर फॉर्मेलिन से भरे लेबल शीशियों में रखें। अंडर-फिक्सिंग से ओवर-फिक्सिंग बेहतर है। शीशियों फॉर्मेलिन के बहुत सारे के साथ बड़ा होना चाहिए-ऊतक की तुलना में कम से कम 20x अधिक लगानेवाला।
    1. आंतों: एक नमूना कप में चार कैसेट एक साथ रखें। 24-48 घंटे के लिए फिक्स।
    2. जिगर: एक 50 एमएल शंक्वाकार ट्यूब में एक साथ जिगर लोब रखें. 24-48 घंटे के लिए फिक्स।
    3. गुर्दे: गुर्दे को 50 एमएल शंक्वाकार ट्यूब में एक साथ रखें। 48-72 घंटे के लिए फिक्स।
      नोट: छंटनी की गई किडनी की तुलना में अनट्रिम्ड किडनी को ठीक करने में अधिक समय लगता है। निर्धारण समय को 24-48 घंटे तक छोटा करने के लिए, गुर्दे को माध्यिका विमान, अनुदैर्ध्य (बाएं गुर्दे) और अनुप्रस्थ (दाएं गुर्दे) के साथ काटा जा सकता है, और फॉर्मेलिन में जमा होने से पहले कैसेट में रखा जा सकता है।
  6. ऊतकों को निर्दिष्ट समय के लिए फॉर्मेलिन में तय किए जाने के बाद, फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) या आसुत जल के साथ कुल्ला और 70% ईटीओएच से भरे लेबल शीशियों में स्थानांतरित करें। ऊतक विज्ञान की प्रतीक्षा करते समय ऊतक को कमरे के तापमान पर अनिश्चित काल तक EtOH में संग्रहीत किया जा सकता है।
    1. आंतों: एक नमूना कप में चार कैसेट एक साथ रखें।
    2. जिगर: एक 50 एमएल शंक्वाकार ट्यूब में एक साथ जिगर लोब रखें.
    3. गुर्दे: गुर्दे को 50 एमएल शंक्वाकार ट्यूब में एक साथ रखें।
  7. तैयार होने पर, ऊतकों को हेमटोक्सिलिन और ईोसिन (एच एंड ई) धुंधला का उपयोग करके ग्लास स्लाइड पर संसाधित किया जाता है। फॉर्मेलिन-फिक्स्ड ऊतकों को ट्रिम करें और फिर उन्हें पैराफिन में एम्बेड करें। स्लाइड पर पांच माइक्रोन वर्गों माउंट और एच एंड ई के साथ दाग.

7. ऊतक स्कोरिंग

  1. ऊतक स्कोरिंग अधिमानतः अनुभवी कर्मियों द्वारा किया जाना चाहिए जो नमूना समूहों के लिए अंधे हैं।
  2. आंतों ischemia Chiu/पार्क स्कोरिंग प्रणाली17 का उपयोग कर रन बनाए हैं.
  3. गुर्दे की क्षति Jablonski स्कोरिंग प्रणाली18,19 का उपयोग कर रन बनाए हैं.
  4. जिगर की क्षति सुजुकी स्कोरिंग प्रणाली20,21 का उपयोग कर रन बनाए हैं.
    नोट: आंतों आईआरआई के कृंतक मॉडल में ऊतक क्षति का आकलन करने के लिए वर्तमान में उपयोग में कई स्कोरिंग सिस्टम हैं। इस अध्ययन में उपयोग की जाने वाली स्कोरिंग प्रणालियों को मनमाने ढंग से अनुमान को कम करने और जानबूझकर गुणात्मक मूल्यांकन(तालिका 1)को अधिकतम करने के लिए चुना गया था।

Representative Results

हमने चूहों में आंतों के आईआरआई के एक मॉडल का प्रदर्शन किया जो लगातार और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करता है। छोटी आंत, समीपस्थ बृहदान्त्र, गुर्दे और यकृत को एच एंड ई के साथ खंडित और दाग दिया गया था। एक पशु रोग विशेषज्ञ ने पहले उल्लेख किए गए स्कोरिंग सिस्टम (तालिका 1) का उपयोग करके ऊतक की चोट को वर्गीकृत किया। सांख्यिकीय विश्लेषण विचरण (एनोवा) के एकल कारक विश्लेषण का उपयोग करके किया गया था, इसके बाद टुकी के पोस्ट हॉक द्वारा जोड़ीवार तुलनाओं के साथ, जिसने निर्धारित किया कि समूहों के भीतर और डेटा में महत्वपूर्ण अंतर था या नहीं। 0.05 से कम या उसके बराबर पी-मान को सांख्यिकीय महत्व स्थापित करने के लिए कटऑफ माना जाता था। सभी सांख्यिकीय परीक्षण और रेखांकन एक स्प्रेडशीट सॉफ्टवेयर (जैसे, माइक्रोसॉफ्ट एक्सेल) में रियल स्टैटिस्टिक्स रिसोर्स पैक ऐड-ऑन के साथ किए गए थे। डेटा को माध्य (SEM) की माध्य ± मानक त्रुटि के रूप में प्रस्तुत किया जाता है।

तीन छोटे आंतों के खंडों (ग्रहणी, जेजुनम और इलियम) के सूक्ष्म घाव स्कोर आंतों के इस्किमिया-रिपरफ्यूजन चोट (आईआरआई; एन = 7) बनाम जो शम लैपरोटॉमी से गुजरते थे (शम; एन = 6) (चित्रा 2 और चित्रा 3)। इन आंकड़ों के लिए मानक त्रुटि संकीर्ण थी, जो समूहों के भीतर और सभी परिणामों की स्थिरता का प्रदर्शन करती थी। शाम समूह में प्रत्येक आंतों के खंड ने 0.83 का सटीक औसत पार्क / शाम समूह में ग्रहणी, जेजुनम और इलियम के लिए एसईएम क्रमशः 0.31, 0.40 और 0.31 था। आईआरआई समूह में ग्रहणी, जेजुनम और इलियम के लिए औसत पार्क / चिउ स्कोर क्रमशः 4.07 ± 0.44, 4.14 ± 0.46 और 5.14 ± 0.40 थे।

इस अध्ययन में, प्रारंभिक चूहों के 50% (3/6) जो 60 मिनट इस्किमिया और 120 मिनट reperfusion (60/120 समूह) से गुजरते थे, की मृत्यु हो गई। तीन चूहों में से दो को नेक्रोप्सी के लिए प्रस्तुत किया गया था। दोनों चूहों में उपकला परिगलन, भीड़ और छोटी आंत का रक्तस्राव था। इसके अलावा, चूहों में लिम्फोसाइटोलिसिस था, जो शारीरिक तनाव से जुड़ा एक निरर्थक परिवर्तन था। न तो माउस के हृदय, फेफड़े, यकृत या गुर्दे में घाव थे। 45 मिनट इस्किमिया और 90 मिनट reperfusion के लिए समय छोटा और 400 IU/kg हेपरिन (45/90/H समूह) में जोड़ने से आंतों की चोट के स्कोर (चित्रा 4) को बदले बिना मृत्यु दर 20% (1/5) तक कम हो गई। 60/120 समूह के लिए औसत पार्क/चिउ स्कोर 4.56 ± 0.38 (एन = 3) था, और 45/90/एच समूह के लिए औसत स्कोर 4.375 ± 0.38 (एन = 4) था।

समीपस्थ बृहदान्त्र, यकृत और गुर्दे में चोट के संकेत देने वाले सूक्ष्म निष्कर्ष 60/120 चूहों या 45/90/एच चूहों में नहीं देखे गए थे।

तालिका 1: आंतों, गुर्दे और यकृत के लिए स्कोरिंग सिस्टम। आंतों की क्षति को चिउ/पार्क प्रणाली17 का उपयोग करके वर्गीकृत किया गया था। गुर्दे की क्षति Jablonski स्कोरिंग प्रणाली18,19 का उपयोग कर वर्गीकृत किया गया था. जिगर की क्षति सुजुकी स्कोरिंग प्रणाली20,21 का उपयोग कर वर्गीकृत किया गया था. इस तालिका को Quaedackers et al.17, Du et al.19, और Behrends et al.21 में प्रस्तुत स्कोरिंग सिस्टम से अनुमतियों के साथ अनुकूलित किया गया है। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 1
चित्रा 1: बेहतर मेसेंटेरिक धमनी (एसएमए) का स्थान और अलगाव। (ए) आम तौर पर, एसएमए अवर वेना कावा के लिए उदर होता है और जानवर के दाईं ओर फैलता है। यह सीलिएक धमनी और वृक्क धमनी के बीच स्थित है। यह आंकड़ा मार्गरेट कुक (1965)22द्वारा द एनाटॉमी ऑफ द लेबोरेटरी माउस से अनुमति के साथ अनुकूलित किया गया है। (बी) इस प्रक्रिया में, आंतों को बाहरी किया जाता है और बाईं ओर फ़्लिप किया जाता है (इस चित्र में सिक्त धुंध के साथ कवर किया जाता है), इसलिए एसएमए (पीला तीर) अवर वेना कावा (नीला तीर) के बाईं ओर स्थित है। संक्षिप्ताक्षर: आरके = सही गुर्दे; डी = ग्रहणी। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: हेमटोक्सिलिन और ईोसिन के साथ दाग छोटे आंतों के खंड। शाम समूह में चूहों से जेजुनम (ए) और इलियम (बी) के वर्गों में विली को चित्रित किया गया था जो विरूपण के बिना लंबे और पतले थे। आईआरआई समूह में चूहों से जेजुनम (सी) और इलियम (डी) के वर्गों में नेक्रोसिस (तारांकन) और रक्तस्राव के क्षेत्रों को शेष विली (तीर) के कुंद और विरूपण के साथ दिखाया गया है। तस्वीरें चूहों से हैं जो 45 मिनट इस्किमिया और 90 मिनट के रीपरफ्यूजन से गुजरती हैं और 400 आईयू / किग्रा हेपरिन प्राप्त करती हैं। तस्वीरें 10% ज़ूम के साथ 20x आवर्धन पर ली गई थीं। स्केल बार = 100 माइक्रोन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्रा 3: छोटे आंतों के खंडों के लिए पार्क / आंतों के इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट (आईआरआई) से गुजरने वाले जानवरों के लिए सभी तीन आंतों के खंडों (ग्रहणी, जेजुनम और इलियम) को सूक्ष्म क्षति उन लोगों की तुलना में काफी बढ़ गई थी जो शम लैपरोटॉमी (शम) से गुजरती थीं। * आईआरआई बनाम शम के लिए पी < 0.05। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: 60 मिनट इस्किमिया और 120 रीपरफ्यूजन बनाम 45 मिनट इस्किमिया और 400 आईयू / किग्रा हेपरिन के साथ 90 मिनट रीपरफ्यूजन से गुजरने वाली छोटी आंतों के लिए पार्क / 60 मिनट इस्किमिया और 120 मिनट reperfusion (60/120) से 45 मिनट ischemia और 400 IU / किग्रा हेपरिन (45/90 / एच) के साथ 90 मिनट reperfusion से समय कम आईआरआई समूह में चूहों की छोटी आंतों के पार्क / Chiu चोट स्कोर में सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर पैदा नहीं किया. हालांकि, इसने मृत्यु दर को 50% से घटाकर 20% कर दिया। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Discussion

इस आंतों के आईआरआई मॉडल के व्यापक उपयोग के बावजूद, यह इसकी सीमाओं के बिना नहीं है। उदाहरण के लिए, एसएमए के आधार का एकमात्र रोड़ा आंत में रक्त के प्रवाह को पूरी तरह से बाधित नहीं करता है। यह मेसेंटरी में व्यापक संपार्श्विक परिसंचरण के कारण होने की संभावना है, जो पेट की महाधमनी की पड़ोसी शाखाओं से रक्त खींच सकता है। बिल्लियों में एक अध्ययन में, एसएमए रोड़ा समीपस्थ ग्रहणी में 35%, डिस्टल ग्रहणी में 61%, जेजुनम और इलियम में 71% और समीपस्थ बृहदान्त्र में 63% तक रक्त प्रवाह में कमी आई। रक्त का प्रवाह मध्य और बाहर का बृहदान्त्र में कम नहीं किया गया था, जो अवर mesenteric धमनी23 से उनके परिसंचरण के ज्यादा प्राप्त. कृन्तकों में, जेजुनम और इलियम को अक्सर आंतों के खंडों के रूप में उद्धृत किया जाता है जो एसएमए रोड़ा9 के बाद सबसे महत्वपूर्ण ऊतक की चोट लगाते हैं।

एसएमए रोड़ा के बाद इस्किमिया समय की एक विस्तृत श्रृंखला को साहित्य में 1 से 90 मिनट या उससे अधिक तक उद्धृत किया गया है। अलग-अलग इस्केमिक समय के परिणामस्वरूप रीपरफ्यूजन चोट के विभिन्न स्तर होते हैं; पार्क एट अल मनाया reperfusion चोट जब इस्कीमिक अंतराल 40 और 60 मिनट के बीच था, लेकिन नहीं जब इस्कीमिक अंतराल कम या अब24 था. इस तरह के परिणाम बताते हैं कि कम समय में reperfusion चोट को उकसाने के लिए पर्याप्त ischemia का उत्पादन नहीं करते हैं, जबकि लंबे समय तक ऊतक इतनी गंभीर रूप से नुकसान होता है कि यह reperfusion चोट है कि यह असंभव है कि इस प्रकार reperfusion चोट का प्रदर्शन करने के लिए है. इसके अलावा, लंबे समय तक इस्केमिक समय में मृत्यु दर में वृद्धि का जोखिम होता है। जैसा कि हमारे अध्ययन में देखा गया है, प्रारंभिक चूहों में से 50% (3/6) जो 60 मिनट इस्किमिया से गुजरते थे, केवल 90 मिनट के पुनरावृत्ति के बाद मृत्यु हो गई। 45 मिनट के लिए ischemia समय छोटा ऊतक चोट स्कोर बदलने के बिना मृत्यु दर 20% (1/5) को कम कर दिया. हमारे अध्ययन के आधार पर, ऐसा प्रतीत होता है कि इस्केमिक क्षति की आदर्श खिड़की लगभग 45 मिनट के लिए एसएमए रोड़ा द्वारा प्राप्त की जा सकती है।

एक अन्य चर ऊतक संग्रह से पहले reperfusion समय है. इस्किमिया समय के साथ, reperfusion बार अध्ययन भर में व्यापक रूप से भिन्न होते हैं, 60 मिनट से 24 घंटे से अधिक. कई कागजात ने बताया है कि आंतों के श्लेष्म को 2 से 3 घंटे के रिपरफ्यूजन पर अधिकतम रूपात्मक क्षति होती है, जिसमें 24 घंटे25,26,27 पर पूरी मरम्मत की जाती है। इस 2 से 3 घंटे खिड़की जोखिम से पहले ऊतक इकट्ठा reperfusion चोट की पूरी सीमा पर कब्जा नहीं है, जबकि ऊतकों 24 घंटे के करीब काटा पहले से ही मरम्मत की प्रक्रिया शुरू कर दिया होगा. हमने शुरू में 120 मिनट के reperfusion समय का विकल्प चुना, लेकिन फिर मृत्यु दर को कम करने के प्रयास में 90 मिनट में बदल गया। इस परिवर्तन ऊतक चोट परिणाम नहीं बदला, सुझाव है कि 2 से 3 घंटे खिड़की से एक 30 मिनट विचलन स्वीकार्य है.

आईआरआई के विकास में ऑक्सीजन एकाग्रता भी एक महत्वपूर्ण चर है। वाइल्डिंग एट अल ने पाया कि, 21% ओ2 प्राप्त करने वाले चूहों की तुलना में, आइसोफ्लुरेन के साथ संवेदनाहारी उन लोगों को 100% ओ2 अनुभवी वेंटिलेशन-छिड़काव बेमेल के कारण एटेलेक्टैसिस के साथ वितरित किया गया था। एक ही अध्ययन में, 100% हे2 प्राप्त चूहों तीव्र श्वसन एसिडोसिस और ऊंचा मतलब धमनीदबाव 28 विकसित. आईआरआई जैसी चोट को प्रेरित करते समय इस तरह के शारीरिक परिवर्तनों से सबसे अच्छा बचा जाता है, जिसमें कई प्रणालीगत कारक शामिल होते हैं। इस प्रकार, 21% O2 आइसोफ्लुरेन डिलीवरी के लिए वाहक गैस के रूप में 100% O2 से अधिक उपयुक्त लगता है।

इस प्रोटोकॉल में हेपरिन का उपयोग बहस के लिए खुला है। हेपरिन विरोधी जमावट और विरोधी भड़काऊ प्रभाव29 के लिए जाना जाता है. हमने पाया कि 60 मिनट इस्किमिया और 120 मिनट reperfusion से 45 मिनट ischemia और 90 IU / किग्रा हेपरिन के साथ 400 मिनट reperfusion से बदलने सूक्ष्म आंतों की चोट नहीं बदला है, लेकिन कम मृत्यु दर किया. एक संभावित स्पष्टीकरण यह है कि हेपरिन ने फेफड़ों और मस्तिष्क जैसे दूर के अंगों को घातक थ्रोम्बोम्बोलिज़्म को रोका, हालांकि हमें मरने वाले शुरुआती दो चूहों की सकल या सूक्ष्म परीक्षा द्वारा नेक्रोप्सी पर इसका सबूत नहीं मिला। हेपरिन के बिना छोटे इस्किमिया और रीपरफ्यूजन समय का उपयोग करना मृत्यु दर को कम करने में उतना ही प्रभावी हो सकता है। यदि ऐसा होता, तो आईआरआई के साथ हस्तक्षेप को कम करने के लिए हेपरिन के उपयोग को त्यागना समझदारी होगी। हालांकि, प्रोटोकॉल में हेपरिन सहित आईआरआई के शल्य चिकित्सा कारणों मॉडल करने के इच्छुक लोगों के लिए उपयुक्त हो सकता है, क्योंकि शल्य चिकित्सा रोगियों को अक्सर हेपरिन पेरी-ऑपरेटिव प्राप्त होता है।

आइसोफ्लुरेन को आंतों की सूजन और इस्किमिया के मामलों में ऊतक सुरक्षात्मक प्रभाव दिखाया गया है, और इसका उपयोग नैदानिक रूप से प्रासंगिक आईआरआई मॉडल30,31,32के साथ हस्तक्षेप कर सकता है। हालांकि, ऑर्गोफ्लोरीन इनहेलेंट (यानी, आइसोफ्लुरेन, सेवोफ्लुरेन) आमतौर पर पशु चिकित्सा और मानव चिकित्सा दोनों में एनेस्थेटिक्स का उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल के लिए आवश्यक संज्ञाहरण की लंबाई 120 मिनट से अधिक है, और इस प्रकार एक इनहेलेंट एक छोटे-अभिनय इंजेक्शन की तुलना में अधिक उपयुक्त है जिसे फिर से खुराक देने की आवश्यकता होगी।

समीपस्थ बृहदान्त्र, यकृत या गुर्दे में कोई सूक्ष्म घाव मौजूद नहीं थे। सूक्ष्म परिवर्तनों की कमी शायद अपेक्षाकृत कम 90 से 120 मिनट reperfusion समय के कारण थी. इसके अलावा, समीपस्थ बृहदान्त्र में अवर मेसेंटेरिक धमनी से रक्त की आपूर्ति होती है। हालांकि, दृश्यमान क्षति की कमी प्रणालीगत चोट से इंकार नहीं करती है। रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-क्वांटिटेटिव पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (आरटी-क्यूपीसीआर) संभवतः टीएनएफ-α जैसे भड़काऊ साइटोकिन्स को मापकर प्रणालीगत चोट को प्रदर्शित करने के लिए एक बेहतर पद्धति है।

इस आंतों के आईआरआई मॉडल के कई रूपों को वर्षों में विकसित किया गया है। 1990 में, मेगिसन एट अल ने प्रदर्शित किया कि एसएमए के अलावा संपार्श्विक वाहिकाओं को बंद करने से मेसेंटेरिक रक्त प्रवाह में अधिक लगातार कमी आई लेकिन मृत्यु दरमें वृद्धि हुई 33. एक और हाल के अध्ययन से पता चला है कि, अपने आधार पर एसएमए occluding के बदले, बाहर का इलियम में ischemia प्रेरित करने के लिए अपने परिधीय और संपार्श्विक शाखाओं ligating मृत्यु दर34 के बिना प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य चोट उपज. स्थानीय धमनी शाखाओं का रोड़ा अधिकतम इस्किमिया सुनिश्चित करता है और एसएमए को अपने आधार पर लिगेटिंग के साथ देखे गए रक्त प्रवाह के मल्टीफोकल, खंडीय कटौती के मुद्दे को संबोधित कर सकता है। हालांकि आंतों के आईआरआई मॉडलिंग की इस वैकल्पिक विधि में आंतों के आईआरआई के स्थानीय ऊतक प्रभावों में अनुसंधान के लिए आवेदन है, यह अज्ञात है कि क्या यह प्रणालीगत सूजन और बहु-अंग विफलता को सटीक रूप से मॉडल कर सकता है जो आंतों की चोट से जुड़ा हो सकता है।

एसएमए रोड़ा सभी प्रकार के आंतों के आईआरआई के लिए एक उपयुक्त मॉडल नहीं है। उदाहरण के लिए, गैर-ओक्लूसिव मेसेंटेरिक इस्किमिया, कार्डियक आउटपुट में कमी से उपजी स्प्लेनचनिक हाइपोपरफ्यूजन की विशेषता है। इसलिए, इस तकनीक मायोकार्डियल रोधगलन, कंजेस्टिव दिल की विफलता, महाधमनी अपर्याप्तता, या गुर्दे या यकृत रोग35 की वजह से आंतों आईआरआई का अध्ययन करने के लिए इष्टतम नहीं होगा. कोजर एट अल ने बताया कि एसएमए रोड़ा, हालांकि, सदमे36 द्वारा प्रेरित आंत आईआरआई के लिए एक नैदानिक रूप से प्रासंगिक मॉडल है। हालांकि कम किफायती, सूअरों जैसी अन्य प्रजातियों के उपयोग से कुछ आंतों की चोट की स्थिति के मॉडलिंग के लिए कृन्तकों पर लाभ हो सकता है। 2014 में गोंजालेज एट अल द्वारा एक व्यापक समीक्षा वर्तमान में आंतों आईआरआई9 की जांच के लिए उपयोग में पशु मॉडल का वर्णन करती है।

अपनी सीमाओं के बावजूद, इसके आधार पर एसएमए occluding की तकनीक आंतों ischemia9 के सबसे अधिक इस्तेमाल कृंतक मॉडल में से एक बनी हुई है. चूंकि इसके लिए केवल एक संवहनी क्लैंप और एक बुनियादी सेटअप की आवश्यकता होती है, इसलिए सर्जरी अपने आप में काफी सरल है। यह प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य चोट भी पैदा करता है, जैसा कि यहां प्रस्तुत आंकड़ों से स्पष्ट है। कृन्तकों में एसएमए रोड़ा आंतों के आईआरआई के रोड़ा कारणों को मज़बूती से मॉडल कर सकता है और पशु चिकित्सा और मानव चिकित्सा दोनों में व्यावहारिक अनुप्रयोग हो सकता है। इस प्रकार, यह महत्वपूर्ण है कि हमने यहां जिन प्रक्रियाओं को रेखांकित किया है, उन्हें निरंतरता के साथ किया जाए।

Disclosures

इस पत्र के लेखकों का खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

इस परियोजना के लिए वित्त पोषण राष्ट्रीय हृदय, फेफड़े और रक्त संस्थान, राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के इंट्राम्यूरल रिसर्च डिवीजन द्वारा प्रदान किया गया था।

हम डॉ. जेम्स हॉकिन्स को उनकी सलाह और समर्थन के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं। हम बेहतर मेसेंटेरिक धमनी का पता लगाने में उनकी सहायता के लिए डॉ. मिहाई ओल्टियन और रॉबर्ट लिनफोर्ड को भी धन्यवाद देते हैं। हम इस प्रोटोकॉल के विकास के दौरान अपनी विशेषज्ञता प्रदान करने के लिए डॉ. पेट्रीसिया कार्वाल्हो ओबेद एलरिच, क्लाउडियो कोरिया नतालिनी और जॉर्ज हॉवेल III को अपना धन्यवाद देना चाहते हैं। अंत में, हम स्टीफन विंकोविच को इस पेपर में दिखाए गए सुंदर फोटोमाइक्रोग्राफ प्राप्त करने में उनकी सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं और डॉ. एलिसिया ओलिवियर को अंतिम आंकड़ों को लेबल करने और प्रस्तुत करने में उनकी मदद के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Adson forceps Roboz RS-5236 Surgical instrument
Alm retractor Roboz RS-6510 Surgical instrument
Anesthesia machine Datex-Ohmeda Aestiva 5
Anesthesia: isoflurane Baxter Healthcare Corporation NDC 10019-360-40 Dose: 1-4%, INH
Angiocath 20 g  x 2 Smiths Medical 5057 Flushing intestines with saline and formalin
Atraumatic microvascular clip Teleflex 065100 Surgical instrument
Buffered formalin 10% Fisher Scientific 23-245684 Tissue fixation
Bupivicaine 0.25% Hospira, Inc. NDC 0409-1160-18 Dose: up to 2 mg/kg drop-wise
Buprenorphine Par Pharmaceutical NDC 42023-179-05 Dose: 1 mg/kg, SQ
Chlorhexidine scrub 2% Vet One 510083 Surgical site prep
Circulating water blanket Cincinnati Sub Zero Blanketrol 2 Body temp maintenance
Clippers - Wahl BravMini, Purple Hair clippers Lambert Vet Supply 008WA-41590-0438 Surgical site prep
Conical tubes 50 ml Fisher Scientific 14-432-22 Tissue fixation and storage
Dry ice N/A N/A PCR tissue samples
EtOH 200 proof The Warner-Graham Company 64-17-5 Tissue storage
Heparin (optional) Meitheal Pharmaceuticals NDC 71288-402-11 Dose: 200-600 IU/kg
Induction chamber VetEquip 941456
Indus Instruments THM100 Rodent Monitor Indus Instruments N/A For monitoring rodent body temperature during surgery
Isopropyl Alcohol 70% Humco NDC 0395-4202-28 For scrubbing surgical site
Microcentrifuge Tubes: 0.6mL Fisher Scientific 05-408-121 PCR tissue samples. 8 per mouse, Terminal bleed collection, serum storage
Microsoft Excel Microsoft N/A
Nose cone N/A N/A Can be homemade with syringe tube or bubble tubing
O2 medical air 21% Roberts Oxygen N/A Rate: 0.5 L/min for each L chamber volume
Ophthalmic ointment Akorn, Inc. NDC 17478-062-35 Surgical prep
PBS pH 7.4 (1x) ThermoFisher Scientific 10010-031 For tissue rinsing and making 70% EtOH
Specimen cups Cardinal Healthcare C13005 For holding tissue cassettes in formalin
Sterile Castroviejo Needle Holder Roboz RS-6412 Surgical instrument
Sterile cotton swabs Medline BXTA50002Z
Sterile gauze Medline PRM21423Z
Sterile Micro Dissecting Scissors Roboz RS-5980 Surgical instrument
Sterile micro dissecting spring scissors Roboz RS-5693 Surgical instrument
Sterile micro forceps Roboz RS-5264 Surgical instrument
Sterile saline (0.9%) Braun R5201-01 Must be warmed
Sterile scalpel blade #15 Cardinal Health (Allegiance) 32295-015 Surgical instrument
Sterile scalpel handle Roboz RS-9843 Surgical instrument
Sterile surgical drape Medline DYNJSD1092
Sterile surgical gloves Medline MSG2270
Sterile surgical stapler Roboz RS-9260 Surgical instrument
Sterile surgical staples Roboz RS-9262 Abdominal skin closure
Sterile suture: Vicryl (polyglactin 910) 6-0, 27" Taper RB-1 Needle Ethicon J212G Closing abdominal muscle
Surgical tape Medline MMM15271Z Securing mouse in dorsal recumbancy
Syringe 10 ml x 2 Medline SYR110010 Flushing intestines with saline and formalin
Tissue cassettes Fisher Scientific 22-038-665 Rolled intestinal segments. 4 per mouse.
Towel or drape Medline GEM2140 Water blanket cover

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References

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