हम खमीर से mitochondria की शुद्धि के लिए एक तेजी से और प्रभावी विधि का वर्णन<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. इस विधि शुद्ध mitochondria के अलगाव उच्च उपज है कि अनिवार्य रूप से अन्य organelles द्वारा संदूषण से मुक्त हैं और उनकी शुद्धि के बाद संरचनात्मक और कार्यात्मक अखंडता बनाए रखने के लिए सक्षम बनाता है.
Abstract
यूकेरियोटिक गैर संश्लेषक कोशिकाओं में एरोबिक चयापचय के दौरान Mitochondria एटीपी उत्पादन का मुख्य साइट<sup> 1</sup>. इन जटिल organelles भी apoptotic कोशिका मृत्यु में आवश्यक भूमिका निभाते हैं<sup2></sup> सेल अस्तित्व<sup> 3</sup> स्तनधारी विकास<sup> 4</sup> Neuronal विकास और समारोह<sup> 4</sup>, Intracellular संकेतन<sup> 5</sup> और दीर्घायु विनियमन<sup6></sup>. इन जटिल जैविक प्रक्रियाओं mitochondria के द्वारा नियंत्रित की हमारी समझ उनके आकारिकी, उनके प्रोटीन और लिपिड संरचना, उनके डीएनए की अखंडता, और उनके कई महत्वपूर्ण कार्यों का आकलन करने के लिए मजबूत तरीकों पर निर्भर करता है. नवोदित खमीर<em> Saccharomyces cerevisiae</em> एनोटेट जीनोम और अच्छी तरह से परिभाषित proteome, के साथ एक आनुवंशिक और biochemically manipulable कोशिकीय यूकेरियोट आणविक और सेलुलर mitochondria की आवश्यक जैविक कार्यों अंतर्निहित तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान मॉडल है. पढ़ाई के इन प्रकार के लिए, यह अत्यधिक शुद्ध mitochondria है महत्वपूर्ण है. यहाँ हम mitochondria खमीर की शुद्धि के लिए एक तेजी से और प्रभावी विधि का एक विस्तृत वर्णन प्रस्तुत करते हैं. यह पद्धति अत्यधिक शुद्ध mitochondria के अलगाव है कि अनिवार्य रूप से अन्य organelles द्वारा संदूषण से मुक्त हैं और उनकी शुद्धि के बाद संरचनात्मक और कार्यात्मक अखंडता बनाए रखने में सक्षम बनाता है. इस विधि द्वारा शुद्ध Mitochondria आवश्यक mitochondrial प्रक्रियाओं के सेल मुक्त पुनर्गठन के लिए उपयुक्त हैं और mitochondrial संरचना और काम करता है, mitochondrial proteome और lipidome, और mitochondrial डीएनए के विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Protocol
सामग्री और विधियों खमीर उपभेदों और विकास की स्थिति जंगली प्रकार तनाव BY4742 (leu2Δ0 MATα his3Δ1 lys2Δ0 ura3Δ0) अमीर YEPD माध्यम में हो गया था (1% खमीर निकालने, 2% peptone, 2% ग्लूकोज). कक्ष में 30 ° Erlenmeyer बोतल में 200 rpm पर "…
Discussion
इस विधि खमीर कोशिकाओं से उच्च उपज शुद्ध mitochondria के अलगाव के लिए सक्षम बनाता है. इस विधि द्वारा शुद्ध Mitochondria अनिवार्य रूप से अन्य organelles द्वारा संदूषण से मुक्त हैं और उनकी शुद्धि के बाद संरचनात्मक और कार्यात्म?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम CIHR और कनाडा के NSERC से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था. VIT एक CIHR नई अन्वेषक और जीनोमिक्स में Concordia विश्वविद्यालय अनुसंधान चेयर, सेल बायोलॉजी और एजिंग है.
Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. Mitochondrial factors with dual roles in death and survival.Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).