Summary

효모 세포 Mitochondria의 정화

Published: August 24, 2009
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Summary

우리는 효모에서 mitochondria의 정화에 대한 신속하고 효과적인 방법을 설명<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. 이 방법은 다른 organelles에 의해 오염의 기본적 자유 및 정화 후 자신의 구조와 기능 무결성을 유지 순수 mitochondria의 높은 수율 격리 수 있습니다.

Abstract

Mitochondria ATP 생산의 주요 사이트는 진핵세포 이외의 광합성 세포에 산소 신진 대사 중에 아르<sup> 1</sup>. 이러한 복잡한 organelles은 apoptotic 세포의 죽음에 필수적인 역할을<sup> 2</sup>, 세포 생존<sup> 3</sup> 포유 동물 개발<sup> 4</sup>의 연결을 개발 및 기능<sup> 4</sup>, 세포내 신호<sup> 5</sup>과 장수 규제<sup> 6</sup>. mitochondria에 의해 제어되는 이러한 복잡한 생물 학적 과정에 대한 우리의 이해는 형태, 그들의 단백질과 지질 조성, 그들의 DNA의 무결성, 그들의 수많은 중요한 기능을 평가하기위한 강력한 방법에 의존합니다. 신진 효모<em> Saccharomyces cerevisiae</em> 주석 게놈하고 잘 정의된 프로테옴과 유전자와 화학적으로 manipulable 단세포 진핵세포 생물은 mitochondria의 필수적인 생물 학적 기능을 기본 분자 및 세포 메커니즘을 연구를위한 가치있는 모델입니다. 연구 이러한 유형의 경우, 그것은 매우 순수한 mitochondria을 가지고 중요합니다. 여기 mitochondria 효모의 정화에 대한 신속하고 효과적인 방법에 대한 자세한 설명을 제시한다. 이 방법은 다른 organelles에 의해 오염의 기본적 자유 및 정화 후 자신의 구조와 기능 무결성을 유지 높은 순수 mitochondria의 절연을 수 있습니다. 이 방법에 의해 정화 Mitochondria은 필수 mitochondrial 프로세스의 셀 – 무료 reconstitution에 적합하고 mitochondrial 구조와 기능, mitochondrial 프로테옴 및 lipidome하고, mitochondrial DNA의 분석에 사용될 수 있습니다.

Protocol

재료 및 방법 효모 변종과 성장 조건 야생 형 변형 BY4742는 (MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) (1 % 효모 추출물, 펩톤 2 %, 2 % 포도당) 풍부한 YEPD 매체에서 재배되었다. 전지는 30 ° C 회전이 5시 1분의 "플라스크 볼륨 / 볼륨 매체"비율 Erlenmeyer flasks의 200 rpm으로 잡고 교양되었습니다. 원유 mitochondrial 분획의 분리 48 H.위한 ?…

Discussion

이 방법은 효모 세포에서 순수 mitochondria의 높은 수율 격리 수 있습니다. 이 방법에 의해 정화 Mitochondria 다른 organelles에 의해 오염의 기본적 자유 및 정화 후 자신의 구조와 기능 무결성을 유지합니다. 필수 mitochondrial 프로세스 셀 – 무료 reconstitution에 적합 mitochondria 설명한 방법 산출. 이 높은 순수 mitochondria는 mitochondrial 구조와 기능, mitochondrial 프로테옴 및 lipidome과 mitochondrial DNA의 분석에도 사용?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 CIHR과 캐나다의 NSERC에서 보조금에 의해 지원되었다. VIT는 CIHR 새로운 인베스티게이터와 게놈의 콩코디아 대학 연​​구 위원장, 세포 생물학 및 노화입니다.

References

  1. Voet, D., Voet, J. G. Biochemistry. , (2004).
  2. Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. Mitochondrial dynamics and apoptosis. Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).
  3. Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. Mitochondrial factors with dual roles in death and survival. Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).
  4. Detmer, S. A., Chan, D. C. Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).
  5. McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. Mitochondria: more than just a powerhouse. Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).
  6. Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. Mitochondria, oxidants, and aging. Cell. 120, 483-495 (2005).
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Cite This Article
Gregg, C., Kyryakov, P., Titorenko, V. I. Purification of Mitochondria from Yeast Cells. J. Vis. Exp. (30), e1417, doi:10.3791/1417 (2009).

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