Zuivering van Mitochondriën uit gistcellen
Summary
Beschrijven we een snelle en effectieve methode voor de zuivering van mitochondriën van de gist<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. Deze methode maakt het mogelijk hoog rendement isolatie van pure mitochondriën die in wezen vrij is van besmetting door andere organellen en behouden hun structurele en functionele integriteit na de zuivering.
Abstract
Mitochondriën zijn de belangrijkste site van ATP productie tijdens aërobe metabolisme in eukaryote niet-fotosynthetische cellen<sup> 1</sup>. Deze complexe organellen spelen ook een essentiële rol in apoptotische celdood<sup> 2</sup>, Overleving van de cel<sup> 3</sup>, Zoogdieren ontwikkeling<sup> 4</sup>, Neuronale ontwikkeling en functie<sup> 4</sup>, Intracellulaire signalisatie<sup> 5</sup>, En een lange levensduur regelgeving<sup> 6</sup>. Ons inzicht in deze complexe biologische processen gecontroleerd door mitochondria is gebaseerd op robuuste methoden voor de beoordeling van hun morfologie, hun eiwitten en lipiden, de integriteit van hun DNA, en hun talrijke vitale functies. De gist<em> Saccharomyces cerevisiae</em>, Een genetisch en biochemisch manipuleerbare eencellige eukaryote met geannoteerde genoom en goed gedefinieerde proteoom, is een waardevol model voor het bestuderen van de moleculaire en cellulaire mechanismen die ten grondslag liggen aan essentiële biologische functies van de mitochondriën. Voor dit soort studies, is het cruciaal om zeer zuiver mitochondriën hebben. Hier presenteren we een gedetailleerde beschrijving van een snelle en effectieve methode voor het zuiveren van gist mitochondriën. Deze methode kan de isolatie van zeer zuivere mitochondriën die in wezen vrij is van besmetting door andere organellen en behouden hun structurele en functionele integriteit na de zuivering. Mitochondria gezuiverd door middel van deze methode zijn geschikt voor celvrij reconstructie van essentiële mitochondriale processen en kan worden gebruikt voor de analyse van mitochondriale structuur en functies, mitochondriale proteoom en lipidome, en mitochondriale DNA.
Protocol
Discussion
Deze methode maakt het mogelijk hoog rendement isolatie van pure mitochondria uit gistcellen. Mitochondria gezuiverd door middel van deze methode zijn in wezen vrij is van besmetting door andere organellen en behouden hun structurele en functionele integriteit na de zuivering. De beschreven methode levert mitochondriën die geschikt zijn voor cel-vrije reconstructie van essentiële mitochondriale processen. Deze zeer zuivere mitochondriën kan ook worden gebruikt voor de analyse van mitochondriale structuur en functies,…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door subsidies van de CIHR en de NSERC van Canada. VIT is een CIHR nieuwe onderzoeker en de Concordia University Research Chair in Genomics, Celbiologie en veroudering.
References
- Voet, D., Voet, J. G. Biochemistry. , (2004).
- Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. Mitochondrial dynamics and apoptosis. Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).
- Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. Mitochondrial factors with dual roles in death and survival. Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).
- Detmer, S. A., Chan, D. C. Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).
- McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. Mitochondria: more than just a powerhouse. Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).
- Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. Mitochondria, oxidants, and aging. Cell. 120, 483-495 (2005).
