Summary
Nós descrevemos um método rápido e eficaz para a purificação de mitocôndrias da levedura<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. Este método permite o isolamento de alto rendimento de mitocôndrias puro que são essencialmente livres de contaminação por outras organelas e manter sua integridade estrutural e funcional após a sua purificação.
Abstract
As mitocôndrias são o principal local de produção de ATP durante o metabolismo aeróbico em eucariotas não fotossintéticos células<sup> 1</sup>. Essas organelas complexo também desempenham um papel essencial na morte celular por apoptose<sup> 2</sup> Sobrevivência da célula,<sup> 3</sup> Desenvolvimento, mamíferos<sup> 4</sup> Desenvolvimento, e função neuronal<sup> 4</sup> Sinalização, intracelular<sup> 5</sup>, Longevidade e regulação<sup> 6</sup>. Nosso entendimento desses processos biológicos complexos controlados pela mitocôndria depende métodos robustos para avaliar sua morfologia, sua proteína e composição lipídica, a integridade de seu DNA, e suas numerosas funções vitais. A levedura de brotamento<em> Saccharomyces cerevisiae</em>, Uma geneticamente e bioquimicamente eukaryote manipuláveis unicelulares com genoma anotado e bem definidos, proteoma, é um modelo valioso para estudar os mecanismos moleculares e celulares subjacentes funções biológicas essenciais da mitocôndria. Para estes tipos de estudos, é crucial ter mitocôndrias de alta pureza. Aqui nós apresentamos uma descrição detalhada de um método rápido e eficaz para a purificação de levedura mitocôndrias. Este método permite o isolamento de mitocôndrias altamente puros que são essencialmente livres de contaminação por outras organelas e manter sua integridade estrutural e funcional após a sua purificação. Mitocôndrias purificadas por esse método são adequados para células livres reconstituição de processos essenciais mitocondrial e pode ser usado para a análise da estrutura mitocondrial e funções, proteoma mitocondrial e lipidome e DNA mitocondrial.
Protocol
Discussion
Este método permite o isolamento de alto rendimento de mitocôndrias puro de células de levedura. Mitocôndrias purificadas por esse método são essencialmente livres de contaminação por outras organelas e manter sua integridade estrutural e funcional após a sua purificação. O método descrito rendimentos mitocôndrias, que são adequados para células livres reconstituição de processos essenciais mitocondrial. Estas mitocôndrias altamente puro pode também ser usado para a análise da estrutura mitocondrial …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por concessões do CIHR e NSERC do Canadá. VIT é um CIHR New Investigator e Concordia University, em Cátedra de Investigação Genómica, Biologia Celular e Envelhecimento.
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