Очистка Митохондрии из дрожжей Клетки
Summary
Мы описываем быстрым и эффективным методом для очистки от митохондрий дрожжей<em> Saccharomyces CEREVISIAE</em>. Этот метод позволяет высокодоходные выделения чистых митохондрий, которые в основном свободны от загрязнения другие органеллы и сохраняют свою структурную и функциональную целостность после их очистки.
Abstract
Митохондрии являются основным местом производства АТФ во время аэробного метаболизма в эукариотических без фотосинтезирующих клеток<sup> 1</sup>. Эти сложные органеллы также играют существенную роль в гибели клеток апоптоза<sup> 2</sup>, Выживаемость клеток<sup> 3</sup>, Развития млекопитающих<sup> 4</sup>, Нейронные развития и функционирования<sup> 4</sup>, Внутриклеточная сигнализация<sup> 5</sup>, И долговечность регулирования<sup> 6</sup>. Наше понимание этих сложных биологических процессов, контролируемых митохондрий опирается на надежные методы для оценки их морфологии, их белка и липидный состав, целостность своей ДНК, и их многочисленные жизненно важные функции. Почкующихся дрожжей<em> Saccharomyces CEREVISIAE</em>, Генетически и биохимически манипуляции одноклеточных эукариот с аннотированный генома и четко определенных протеома, является ценной моделью для изучения молекулярных и клеточных механизмов, лежащих существенные биологические функции митохондрий. Для такого рода исследований, крайне важно иметь высокую чистую митохондрий. Здесь мы приводим подробное описание быстрым и эффективным методом для очистки дрожжей митохондрий. Этот метод позволяет изоляции высокочистых митохондрий, которые в основном свободны от загрязнения другие органеллы и сохраняют свою структурную и функциональную целостность после их очистки. Митохондрии очищают этот метод подходит для бесклеточных восстановление основных митохондриальных процессов и может быть использован для анализа митохондриальной структуры и функций, митохондриальная протеома и lipidome и митохондриальной ДНК.
Protocol
Discussion
Этот метод позволяет высокодоходные выделения чистых митохондрий из клеток дрожжей. Митохондрии очищают этот метод в основном свободны от загрязнения другие органеллы и сохраняют свою структурную и функциональную целостность после их очистки. Описанный метод дает митохондрий, кото?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами CIHR и NSERC Канады. VIT является следователь CIHR Новые и Concordia University исследований кафедры геномики, клеточной биологии и старения.
References
- Voet, D., Voet, J. G. Biochemistry. , (2004).
- Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. Mitochondrial dynamics and apoptosis. Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).
- Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. Mitochondrial factors with dual roles in death and survival. Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).
- Detmer, S. A., Chan, D. C. Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).
- McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. Mitochondria: more than just a powerhouse. Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).
- Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. Mitochondria, oxidants, and aging. Cell. 120, 483-495 (2005).
