Purificazione dei mitocondri da cellule di lievito
Summary
Descriviamo un metodo rapido ed efficace per la purificazione dei mitocondri dal lievito<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. Questo metodo consente ad alto rendimento puro isolamento di mitocondri che sono essenzialmente privo di contaminazione da parte di altri organuli e mantengono la loro integrità strutturale e funzionale dopo la loro purificazione.
Abstract
I mitocondri sono la sede principale della produzione di ATP durante il metabolismo aerobico in eucarioti fotosintetici non-cellule<sup> 1</sup>. Questi organelli complessi giocano un ruolo essenziale anche nella morte cellulare per apoptosi<sup> 2</sup>, Cellula di sopravvivenza<sup> 3</sup>, Lo sviluppo dei mammiferi<sup> 4</sup>, Lo sviluppo e la funzione neuronale<sup> 4</sup>, Di segnalazione intracellulare<sup> 5</sup>, E la longevità regolamento<sup> 6</sup>. La nostra comprensione di questi complessi processi biologici controllati dai mitocondri si basa su metodi affidabili per valutare la loro morfologia, la loro composizione proteica e lipidica, l'integrità del loro DNA, e le loro numerose funzioni vitali. Il lievito in erba<em> Saccharomyces cerevisiae</em>, Un organismo geneticamente e biochimicamente eucarioti unicellulari manipolabili con genoma annotati e ben definite proteoma, è un modello valido per lo studio dei meccanismi molecolari e cellulari alla base essenziali funzioni biologiche dei mitocondri. Per questi tipi di studi, è fondamentale avere mitocondri altamente puro. Presentiamo qui una descrizione dettagliata di un metodo rapido ed efficace per la depurazione di lievito mitocondri. Questo metodo consente l'isolamento di mitocondri altamente puri, che sono essenzialmente priva di contaminazione da parte di altri organuli e mantengono la loro integrità strutturale e funzionale dopo la loro purificazione. I mitocondri purificati con questo metodo sono adatti per cell-free ricostituzione di processi essenziali mitocondriale e può essere utilizzato per l'analisi della struttura e delle funzioni mitocondriali, proteoma mitocondriale e lipidome, e del DNA mitocondriale.
Protocol
Discussion
Questo metodo consente ad alto rendimento puro isolamento dei mitocondri da cellule di lievito. I mitocondri purificati con questo metodo sono essenzialmente priva di contaminazione da parte di altri organuli e mantengono la loro integrità strutturale e funzionale dopo la loro purificazione. I rendimenti metodo descritto mitocondri che sono adatti per cell-free ricostituzione di processi essenziali mitocondriale. Questi mitocondri elevata purezza può essere utilizzato anche per l'analisi della struttura e delle fu…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dalle concessioni dal CIHR e la NSERC del Canada. VIT è un investigatore CIHR New Research Chair e Concordia University di Genomica, Biologia Cellulare e invecchiamento.
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