Purificación de las mitocondrias de las células de levadura
Summary
Se describe un método rápido y eficaz para la purificación de las mitocondrias de la levadura<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. Este método permite el aislamiento de alto rendimiento de puro mitocondrias, que son esencialmente libres de contaminación por otros orgánulos y mantener su integridad estructural y funcional después de su purificación.
Abstract
Las mitocondrias son el sitio principal de producción de ATP durante el metabolismo aeróbico en eucariotas no fotosintéticos células<sup> 1</sup>. Estos orgánulos complejos también juegan un papel esencial en la muerte celular por apoptosis<sup> 2</sup>, La supervivencia celular<sup> 3</sup>, Desarrollo de los mamíferos<sup> 4</sup>, El desarrollo neuronal y la función<sup> 4</sup>, La señalización intracelular<sup> 5</sup>, Y la longevidad de la regulación<sup> 6</sup>. Nuestra comprensión de estos complejos procesos biológicos controlados por las mitocondrias se basa en métodos robustos para la evaluación de su morfología, la proteína y la composición de los lípidos, la integridad de su ADN, y sus numerosas funciones vitales. La levadura en ciernes<em> Saccharomyces cerevisiae</em>, Una genéticamente y bioquímicamente eucariotas unicelulares manipulable con el genoma y el proteoma anotada bien definido, es un valioso modelo para el estudio de los mecanismos moleculares y celulares subyacentes a las funciones biológicas esenciales de las mitocondrias. Para este tipo de estudios, es fundamental contar con las mitocondrias de alta pureza. Aquí se presenta una descripción detallada de un método rápido y eficaz para la purificación de la mitocondria de levadura. Este método permite el aislamiento de alta pureza, las mitocondrias, que son esencialmente libres de contaminación por otros orgánulos y mantener su integridad estructural y funcional después de su purificación. Las mitocondrias purificadas por este método son adecuados para la libre de células de la reconstitución de los procesos esenciales de la mitocondria y se puede utilizar para el análisis de la estructura mitocondrial y funciones, y proteoma mitocondrial lipidome, y el ADN mitocondrial.
Protocol
Discussion
Este método permite el aislamiento de alto rendimiento de puro mitocondrias de células de levadura. Las mitocondrias purificadas por este método son esencialmente libres de contaminación por otros orgánulos y mantener su integridad estructural y funcional después de su purificación. El método descrito mitocondrias rendimientos que son adecuados para células libres de la reconstitución de los procesos esenciales mitocondrial. Estas mitocondrias de alta pureza también se puede utilizar para el análisis de la e…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por becas de los CIHR y NSERC de Canadá. VIT es un investigador de Nueva CIHR y Concordia Cátedra de Investigación de la Universidad de genómica, biología celular y el envejecimiento.
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