在成年斑马鱼的全肾骨髓移植

Summary

Abstract

造血干细胞（HSC）是一种罕见的多能干细胞，维持一个有机体的整个生命的所有区别的血谱系人口。 HSC的功能定义是移植的细胞，有能力重建所有的血液辐照收件人长期谱系。这指定成立几十年来在哺乳动物系统的开创性工作。利用造血干细胞移植（HCT）和反向基因操作在小鼠，HSC的生物学的基本调控因子也开始亮相，但在很大程度上仍是探索。近日，斑马鱼已成为一个强大的遗传模型来研究脊椎动物的造血功能。建立在斑马鱼的小贩管理队，将允许科学家利用大型的遗传和化学的筛查方法，在斑马鱼揭示底层HSC的调节的新机制。在这篇文章中，我们展示了一个方法来执行在成年斑马鱼的小贩管理队。我们表明斑马鱼的整个肾骨髓的清扫和准备，在斑马鱼的成人造血网站，这些体细胞通过腔内注射照射收件人鱼流通。此外，我们描述了在一个“加护病房”鱼移植后的护理，以增加他们的长期健康。一般情况下，温柔的呵护鱼之前，期间和之后，移植是关键，以增加鱼的数量将存活超过1个月以下的程序，这是必要的评估（<3个月）长期植入。将别处发表的实验数据，用于建立本议定书。建立这个协议将允许的大规模的斑马鱼遗传学和移植生物学合并。

Protocol

放射照射25Gy移植前2天的WT鱼肾夹层牺牲tricaine（〜100ml 4mg/ml Tricaine中/升鱼水）（平均每50万捐助鱼类细胞）的适当数量的荧光捐助者隔离到0.9倍PBS + 5％FCS + 1％宾夕法尼亚链球菌（“PBS +”）在管的肾分手用1ml吸管，然后用10ml注射器18 1 / 2 G针转移到50毫升锥形，并填写用PBS + 离心1500RPM 8分钟时倒出来，重新悬浮颗粒40micron过?…