アダルトゼブラフィッシュの全腎骨髄の移植

Summary

Abstract

造血幹細胞（HSC）は、生物の生活全体のすべての差別化された血液の系統を維持する多能性細胞の珍しい集団である。 HSCの機能定義を再構成照射受信長期のすべての血の系譜をする能力を有し、移植細胞である。この指定は、哺乳動物系における精液の仕事の十年によって設立されました。造血細胞移植（HCT）およびマウスにおける逆遺伝学的操作を使用して、HSC生物学の基盤となる調節因子が発表され始めているが、まだ大部分の下に、検討されています。最近、ゼブラフィッシュは、脊椎動物の造血を研究する強力な遺伝的モデルとして登場しました。ゼブラフィッシュでHCTを確立することは科学者がHSC規制の基礎となる新たなメカニズムを明らかにするためにゼブラフィッシュで利用可能な大規模な遺伝学的および化学的スクリーニングの手法を活用することができます。この記事では、成人のゼブラフィッシュでHCTを実行する方法を示しています。我々は解剖と準備ゼブラフィッシュ全体腎臓、骨髄の、ゼブラフィッシュにおける成人造血のサイト、および心臓内注射を介して照射したレシピエント魚の循環にこれらのドナー細胞の導入を示しています。さらに、我々は、彼らの長期的な健康を高めるために、"ICU"で魚の移植後のケアについて説明します。魚の一般的な、穏やかなケアの中に、前、そして後の移植は、長期の評価（<3月）移植に不可欠な一ヶ月以上の次の手順を、存続する魚の数を増やすことが重要です。このプロトコルを確立するために使用される実験データは別の場所に公開されます。このプロトコルの確立は、大規模なゼブラフィッシュの遺伝学と移植の生物学の合併が可能になります。

Protocol

照射移植前に25Gy 2日間でWT魚を照射腎臓の解剖 tricaine（〜100ミリリットル4mg/ml Tricaine /魚の水のリットル）（ドナー魚あたり500,000個の細胞の平均）で蛍光ドナーの適切な数を生け贄に捧げるチューブに0.9 PBS +5％FCS + 1％ペン連鎖球菌（"PBS +"）に腎臓を隔離 18 1 / 2 Gの針と10mlの注射器とし、1mlのピペットで分割円錐50mLの中に移?…