Transplante de Medula Renal inteiro em Zebrafish Adulto
Summary
Abstract
Células-tronco hematopoiéticas (HSC) são uma população rara de células pluripotentes que mantêm todas as linhagens de sangue diferenciada ao longo da vida de um organismo. A definição funcional de um HSC é uma célula transplantada que tem a capacidade de reconstituir todas as linhagens de sangue de um termo destinatário irradiados longo. Esta designação foi estabelecida por décadas de trabalho seminal em mamíferos. Utilizando transplante de células hematopoiéticas (TCH) e reverter manipulações genéticas no mouse, os factores subjacentes reguladoras da biologia HSC estão começando a ser revelada, mas ainda são largamente sub-exploradas. Recentemente, o peixe-zebra emergiu como um poderoso modelo genético para estudo hematopoiese vertebrados. Estabelecer HCT em zebrafish permitirá que os cientistas utilizam em grande escala metodologias de triagem genética e química disponível em zebrafish para revelar novos mecanismos subjacentes ao Regulamento HSC. Neste artigo, vamos demonstrar um método para executar HCT em peixe-zebra adulto. Nós mostramos a dissecação e preparação de medula renal zebrafish todo, o local de hematopoiese adulto no peixe-zebra, e com a introdução dessas células de doadores para a circulação de peixes destinatário irradiado via injeção intracardíaca. Além disso, descrevemos os cuidados pós-transplante de peixes em uma "UTI" para aumentar a sua saúde a longo prazo. No atendimento, em geral suave do peixe antes, durante e após o transplante é fundamental para aumentar o número de peixes que vão sobreviver mais de um mês após o procedimento, que é essencial para a avaliação de longo prazo (<3 meses) o enxerto. Os dados experimentais utilizados para estabelecer este protocolo será publicado em outro lugar. O estabelecimento deste protocolo vai permitir a fusão da genética em larga escala zebrafish e biologia transplante.
