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Die Transplantation von Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafisch

Published: February 25, 2007
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Abstract

Hämatopoetischen Stammzellen (HSC) sind eine seltene Population von pluripotenten Zellen, die alle differenzierten Blut-Linien während der gesamten Lebensdauer eines Organismus aufrecht zu erhalten. Die funktionale Definition eines HSC ist eine transplantierte Zelle, die die Fähigkeit zur Wiederherstellung all das Blut Linien eines bestrahlten Empfänger langfristig hat. Diese Bezeichnung wurde von Jahrzehnten der bahnbrechenden Arbeit in Säugetier-Systemen etabliert. Mit hämatopoetische Stammzelltransplantation (HCT) und genetische Manipulationen in der Maus, sind die zugrunde liegenden regulatorischen Faktoren von HSC Biologie Anfang an vorgestellt werden, sind aber immer noch weitgehend unter-erforscht. Vor kurzem hat der Zebrafisch als leistungsfähige genetische Modell, Wirbeltier Hämatopoese Studie hervor. Gründung HCT in Zebrafisch wird den Wissenschaftlern ermöglichen, die groß angelegte genetische und chemische Screening-Methoden zur Verfügung im Zebrafisch neuartige Mechanismen HSC Regelung offenbaren nutzen zu können. In diesem Artikel zeigen wir eine Methode, um HCT bei erwachsenen Zebrafisch durchführen. Wir zeigen die Zerlegung und Aufbereitung von Zebrafisch gesamte Niere Knochenmark, dem Ort der Blutbildung Erwachsenen in der Zebrafisch, und die Einführung dieser Spenderzellen in den Kreislauf von bestrahlten Empfänger Fisch über intrakardiale Injektion. Zusätzlich beschreiben wir die nach der Transplantation Pflege von Fischen in einem "ICU", um ihre langfristige Gesundheit zu erhöhen. Im Allgemeinen sanfte Pflege der Fische vor, während und nach der Transplantation ist entscheidend für die Anzahl der Fische, die mehr als einen Monat nach dem Verfahren, die wesentlich für die Beurteilung der langfristigen (<3 Monate) Transplantation ist überleben wird zunehmen. Die experimentellen Daten verwendet, um dieses Protokoll zu etablieren wird an anderer Stelle veröffentlicht werden. Die Einrichtung dieses Protokoll wird für die Fusion der großen Zebrafisch Genetik und Biologie Transplantation zu ermöglichen.

Protocol

Bestrahlung Bestrahlen WT Fisch 25Gy 2 Tage vor der Transplantation Kidney Dissektion Sacrifice entsprechende Anzahl von fluoreszierenden Spender in Tricaine (~ 100ml 4mg/ml Tricaine / Liter Fisch Wasser) (Durchschnitt von 500.000 Zellen pro Spender Fisch) Isolieren Niere in 0.9X PBS + 5% FCS + 1% Penn Strep ("PBS +") in Rohr Break up mit 1ml Pipette, dann mit 10ml Spritze mit 18 1 / 2 G-Nadel Transfer in 50 mL konische und f?…
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Cite This Article
LeBlanc, J., Venezia Bowman, T., Zon, L. Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (2), e159, doi:10.3791/159 (2007).

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