조혈 줄기 세포 (HSC)는 유기체의 생활 전반에 걸쳐 모든 차별화된 혈액 lineages을 유지 pluripotent 세포의 드문 인구입니다. HSC의 기능 정의는 reconstitute 조사받는 장기의 모든 혈액 lineages을 수있는 능력을 가진 세포 이식입니다. 이 지정은 포유류의 시스템에 있게한 작품의 수십에 의해 설립되었습니다. 조혈 세포 이식 (HCT)와 마우스의 반대로 유전자 조작을 사용하여, HSC 생물학의 기본 규제 요소가 발표되기 시작하지만, 여전히 대부분 아래 – 탐험입니다. 최근 zebrafish는 척추 조혈을 연구하는 강력한 유전자 모델로 떠오르고있다. zebrafish에서 HCT를 구축하는 것은 과학자들이 HSC 규정을 기본 메커니즘 소설을 나타내기 위해 zebrafish에서 사용할 수있는 대규모 유전 및 화학 검사 방법을 이용하실 수 있습니다. 이 문서에서는, 우리는 성인 zebrafish에서 HCT를 수행하는 방법을 보여줍니다. 우리는 절개 및 준비 zebrafish 전체 신장 골수의 조혈 zebrafish에있는 성인의 사이트 및 intracardiac 주사를 통해 조사받는 물고기의 순환에이 기증자 세포의 도입을 보여줍니다. 또한, 우리는 그들의 장기 건강을 높이기 위해 'ICU'에 물고기의 사후 이식 치료를 설명합니다. 물고기의 일반적인, 젠틀 케어 년 동안 전, 후 이식은 장기 평가 (<3 월) engraftment을 위해 필수적이며, 하나 이상 개월 다음과 같은 절차를 살아남을 것입니다 물고기의 수를 늘리는 것이 중요합니다. 이 프로토콜을 설정하는 데 사용 실험 데이터가 다른 곳으로 게시됩니다. 이 프로토콜의 설립 대규모 zebrafish의 유전 및 이식 생물학의 합병에 대한 수 있습니다.
Protocol
조사 이식하기 전에 25Gy 이일에 비추다의 WT 물고기 키드니 해부 tricaine (~ 100ml 4mg/ml Tricaine / 생선 물 리터) (기증자 생선 당 500,000 세포의 평균)의 형광 기증자의 적절한 숫자를 희생 0.9X PBS + 5% FCS에 + 1퍼센트 펜 strep ( "PBS +") 튜브로 신장 분리 18 1 / 2 G의 바늘로 10ml의 주사기와 다음, 1ml pipet와 휴식 원뿔 50mL로 전송하고 PBS로 채?…