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성인 Zebrafish의 전체 신장 마로우의 이식

Published: February 25, 2007
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Abstract

조혈 줄기 세포 (HSC)는 유기체의 생활 전반에 걸쳐 모든 차별화된 혈액 lineages을 유지 pluripotent 세포의 드문 인구입니다. HSC의 기능 정의는 reconstitute 조사받는 장기의 모든 혈액 lineages을 수있는 능력을 가진 세포 이식입니다. 이 지정은 포유류의 시스템에 있게한 작품의 수십에 의해 설립되었습니다. 조혈 세포 이식 (HCT)와 마우스의 반대로 유전자 조작을 사용하여, HSC 생물학의 기본 규제 요소가 발표되기 시작하지만, 여전히 대부분 아래 – 탐험입니다. 최근 zebrafish는 척추 조혈을 연구하는 강력한 유전자 모델로 떠오르고있다. zebrafish에서 HCT를 구축하는 것은 과학자들이 HSC 규정을 기본 메커니즘 소설을 나타내기 위해 zebrafish에서 사용할 수있는 대규모 유전 및 화학 검사 방법을 이용하실 수 있습니다. 이 문서에서는, 우리는 성인 zebrafish에서 HCT를 수행하는 방법을 보여줍니다. 우리는 절개 및 준비 zebrafish 전체 신장 골수의 조혈 zebrafish에있는 성인의 사이트 및 intracardiac 주사를 통해 조사받는 물고기의 순환에이 기증자 세포의 도입을 보여줍니다. 또한, 우리는 그들의 장기 건강을 높이기 위해 'ICU'에 물고기의 사후 이식 치료를 설명합니다. 물고기의 일반적인, 젠틀 케어 년 동안 전, 후 이식은 장기 평가 (<3 월) engraftment을 위해 필수적이며, 하나 이상 개월 다음과 같은 절차를 살아남을 것입니다 물고기의 수를 늘리는 것이 중요합니다. 이 프로토콜을 설정하는 데 사용 실험 데이터가 다른 곳으로 게시됩니다. 이 프로토콜의 설립 대규모 zebrafish의 유전 및 이식 생물학의 합병에 대한 수 있습니다.

Protocol

조사 이식하기 전에 25Gy 이일에 비추다의 WT 물고기 키드니 해부 tricaine (~ 100ml 4mg/ml Tricaine / 생선 물 리터) (기증자 생선 당 500,000 세포의 평균)의 형광 기증자의 적절한 숫자를 희생 0.9X PBS + 5% FCS에 + 1퍼센트 펜 strep ( "PBS +") 튜브로 신장 분리 18 1 / 2 G의 바늘로 10ml의 주사기와 다음, 1ml pipet와 휴식 원뿔 50mL로 전송하고 PBS로 채?…
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Cite This Article
LeBlanc, J., Venezia Bowman, T., Zon, L. Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (2), e159, doi:10.3791/159 (2007).

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