細胞膜の拡張機能と癌細胞の接着の役割を勉強のキャラクタリゼーション
Summary
本研究は、ユーティリティおよび定量的細胞膜拡張測定と細胞の接着能の相関性を示します。代表的な例として、Dickkopf 関連蛋白質 3 を紹介して (DKK3) が増加 lobopodia 形成を促進し、副腎皮質癌における細胞接着細胞の in vitro。
Abstract
細胞膜の拡張レパートリーは、がん細胞の接着と渡り鳥の電位を含む様々 な悪性挙動を変調します。正確に分類細胞延長の定量化し、細胞の接着能に及ぼす影響を測定する能力はどのように細胞シグナル伝達イベント衝撃がん細胞挙動と積極性を決定する重要です。ここでは、体外でデザインと、セル拡張メソッドの使用数量と共に設立の in vitroモデルの粘着能力試験と副腎皮質癌 (ACC) について述べる。具体的には、DKK3 の効果推定腫瘍抑制因子とプロの分化抑制因子 SW 13 ACC 細胞株の膜の拡張表現型をテストします。比較的単純な信頼性の高いを提供するためにこれらのアッセイを提案し、簡単に解釈できるメトリック測定様々 な実験条件下でのこれらの特性。
Introduction
調節不全 WNT シグナル伝達は、副腎悪性腫瘍1で重要な役割を果たしています。本研究で使用される方法を調査かどうか DKK3 のサイレンシング、wnt シグナル伝達の負の調節因子副腎皮質における脱分化イベントを表しますセル拡張レパートリー変更のコンテキストで腫瘍形成を促進します。DKK3 は 38 kDa 分泌される糖タンパク質 N 末端のシグナルペプチドとその強制式は積極的な悪性の挙動を抑制、逆に上皮間葉こと、細胞周期の停止で起因した前の調査は示した遷移2。
副腎皮質癌 (ACC) および他の癌の悪性の挙動も含む腫瘍細胞浸潤を円滑に細胞外のマトリックスでは、周囲の表面とのインタ フェースする腫瘍細胞の機能に影響し、移行3。癌の進行の特定細胞膜拡張機能の役割はますます糸状の形成を主に、さまざまなコンテキストで例示されています。たとえば、L 型カルシウム チャネルの過剰発現は、糸状の形成を誘導し、腫瘍細胞浸潤4を促進する発見されています。同様に、ファシン、アクチン結合タンパク質の最小正常組織単位も発現がん細胞突起の形成5に。Lobopodia 形成により細胞外のマトリックスを通って効果的に移行する非悪性線維芽細胞、しかしでは線維肉腫細胞が細胞の移動を容易にする lobopodia の代わりにマトリックスメタロプロテアーゼ活性に頼ることを示されていると侵略6。我々 はその腫瘍を示されている抑制、Ras 協会ドメイン家族 1 アイソ フォーム (RASSF1A) を含む、DKK3、骨格要素を変えるとケラトサイト形成を促進し、侵襲プロパティ7、8を阻むことができます。
など、発がん、細胞膜拡張子変更、特に糸状、lobopodia、およびケラトサイト形成試験条件下での評価との関係に関与する遺伝子の効果を特徴付けるため重要です。現在最新の技術は、データ収集と解釈のますます洗練された顕微鏡検査方法、蛍光標識および複雑なコンピューターのアルゴリズムの使用を含んでいます。これらのメソッドは、新しい強力な分析ツールを提供する、その複雑さは、彼らの広範な使用と細胞生物学実験の適応性を制限します。さらに、正確な定量化とセル拡張形態変化の観察は通常測定9,10ではありません。対照的に、ここで標準的な顕微鏡技術と容易に適応できる体外メソッドを使用してセルの拡張子変更を正確に定量化する手法を紹介します。これらのメソッドはまた同時に分析の各セルの各セル拡張機能の種類を定量化し、細胞膜の拡張レパートリーで全体的な変更を確認します。また、どのようにこれらの変更は、細胞接着特性を関連付けることができます.
実験例として、SW-13 SW-DDK3、pCMV6-エントリ/DKK3 プラスミッドのベクトル安定発現されている、構成 DKK3、副腎における差別化要因を染色を指定の以前に作成された細胞株を使用します。非-南西 13 細胞と SW 13 細胞安定発現する空のベクター (pCMV6 エントリ)、SW-ネオを指定は、実験コントロールとして機能します。
Protocol
Representative Results
Discussion
ここで簡単に、いくつかの落とし穴と各種のテスト条件に適用することができます信頼性の高い再現性とセル拡張機能を特徴付けるための体外定量的手法について述べる。また、細胞膜拡張機能の観察された変化の潜在的な機能的意義を関連付けるためシンプルで定量化可能な接着や運動アッセイを同時に実行できます。
しかし、これらのメソッドは、いくつか?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
大瀬助成財団の資金この作品。
Materials
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | ThermoFisher | 11965-092 | Supplemented with fetal bovine serum and penicllin and streptomycin |
| Deulbeco's Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D8537 | 1X solution, used directly |
| 3.7% formaldehyde | Sigma-Aldrich | F8775 | Dilute stock solution |
| 0.05% crystal violet | Harleco | 192-12 | Dilute stock solution |
| De-ionized water | NA | NA | NA |
| Microscope with 400X magnification | NA | NA | NA |
| 6-well plates | Corning | 353046 | NA |
| Cell dissociation solution non-enzymatic 1X | Sigma-Aldrich | C5914 | 1X solution, used directly |
References
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