Injection de Morpholino : Une méthode pour abattre l’expression des gènes cibles pour étudier la fonction chez zebrafish

Abstract

Source : Hyde D.R., et coll. Électroporation in vivo de Morpholinos dans l’aileron adulte régénérant de queue de poisson zèbre. J. Vis. Exp. (2012)

Le protocole décrit le renversement ciblé de l’expression des gènes chez le poisson zèbre par injection de morpholino dans la queue.

Protocol

1. Injection de Morpholino La veille de l’injection du morpholino, faire une plaque d’injection (Figure 1). Assurez-vous de couper une encoche à une extrémité du puits, ce qui aide à stabiliser le poisson pour la procédure de microinjection. Diluer le morpholino marqué fluorescéine à la bonne concentration (recommander de commencer par 1,2 mM) et placer dans un bain d’eau de 65 °C, pendant 5 minutes. Chargez l’aiguille avec le morpholino<str…

Representative Results

Figure 1. A. Schéma de la plaque d’injection, qui est faite à partir d’agarose et contient un petit puits pour retenir le poisson pendant la microinjection du morpholino. Figure 2. Schéma de microinjection morpholino. R. Placez le poisson dans le plat avec la tête du p…

Materials

Morpholino	GeneTools, LLC		Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump	World Precision Instruments, Inc.	PV830	Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator	World Precision Instruments, Inc.	MMJR	Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter	World Precision Instruments, Inc.	1B100F-4	These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder	World Precision Instruments, Inc.	5430-ALL	Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller	Sutter Instrument Co.	P-97	Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope	Leica, Nikon, Zeiss	Number varies depending on the manufacturer	Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol	Sigma-Aldrich	77861-1L	Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia