Протокол описывает целевой нокдаун экспрессии генов у зебры путем инъекции морфолино в хвост.
Protocol
1. Инъекция Морфолино За день до введения морфолино сделайте инъекционной пластины(рисунок 1). Убедитесь в том, чтобы вырезать выемку на одном конце хорошо, что помогает стабилизировать рыбу для микроинъекции процедуры. Разбавить морфолино с тегами флуореск…
Representative Results
Рисунок 1. A. Схема инъекционной пластины, которая изготовлена из агарозы и содержит небольшой колодец для удержания рыбы во время микроинъекции морфолино. Рисунок 2.</s…
Materials
Morpholino
GeneTools, LLC
Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump
World Precision Instruments, Inc.
PV830
Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator
World Precision Instruments, Inc.
MMJR
Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter
World Precision Instruments, Inc.
1B100F-4
These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder
World Precision Instruments, Inc.
5430-ALL
Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller
Sutter Instrument Co.
P-97
Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope
Leica, Nikon, Zeiss
Number varies depending on the manufacturer
Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol
Sigma-Aldrich
77861-1L
Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).