Morpholino-Injektion: Eine Methode, um die Genexpression zum Studium der Funktion bei Zebrafischen zu versuchen

Abstract

Quelle: Hyde D.R., et al. In vivo Elektroporation von Morpholinos in die regenerierende erwachsene ZebrafischSchwanzflosse. J. Vis. (2012)

Das Protokoll beschreibt den gezielten Knockdown der Genexpression bei Zebrafischen durch Morpholino-Injektion im Schwanz.

Protocol

1. Morpholino-Injektion Am Tag vor der Injektion des Morpholino, machen Sie eine Injektionsplatte (Abbildung 1). Achten Sie darauf, eine Kerbe an einem Ende des Brunnens auszuschneiden, was hilft, den Fisch für das Mikroinjektionsverfahren zu stabilisieren. Das fluorescein-markierte Morpholino auf die richtige Konzentration (empfohlen ab 1,2 mM) verdünnen und 5 Minuten in ein 65 °C-Wasserbad geben. Laden Sie die Nadel mit dem Morpholino(Hinweis:</…

Representative Results

Abbildung 1. A. Schematische der Injektionsplatte, die aus Agarose hergestellt wird und einen kleinen Brunnen enthält, um den Fisch während der Mikroinjektion des Morpholinos zu halten. Abbildung 2. Schematische Morpholino-Mikroinjektion. A. Legen Sie den Fisch in das Gerich…

Materials

Morpholino	GeneTools, LLC		Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump	World Precision Instruments, Inc.	PV830	Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator	World Precision Instruments, Inc.	MMJR	Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter	World Precision Instruments, Inc.	1B100F-4	These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder	World Precision Instruments, Inc.	5430-ALL	Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller	Sutter Instrument Co.	P-97	Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope	Leica, Nikon, Zeiss	Number varies depending on the manufacturer	Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol	Sigma-Aldrich	77861-1L	Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia