Inyección de Morpholino: un método para derribar la expresión génica objetivo para estudiar la función en el pez cebra
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Hyde D.R., et al. Electroporción in vivo de Morpholinos en la aleta de cola de pez cebra adulta regeneradora. J. Vis. (2012)
El protocolo describe el derribo selectivo de la expresión génica en el pez cebra mediante inyección de morpholino en la cola.
Protocol
1. Inyección de Morpholino El día antes de inyectar el morpholino, hacer una placa de inyección (Figura 1). Asegúrese de cortar una muesca en un extremo del pozo, lo que ayuda a estabilizar el pescado para el procedimiento de microinjección. Diluir el morpholino etiquetado con fluoresceína a la concentración adecuada (recomendar a partir de 1,2 mM) y colocar en un baño de agua de 65 °C, durante 5 minutos. Cargue la aguja con el morpholino(no…
Representative Results
Figura 1. A. Esquema de la placa de inyección, que está hecha de agarose y contiene un pequeño pozo para sostener el pescado durante la microinjección del morpholino. Figura 2. Esquemático de microinyección morpholino. R. Coloque el pescado en el plato con la cabeza del …
Materials
| Morpholino | GeneTools, LLC | Morpholino should be custom designed to your protein of interest | |
| Micro-injection pump | World Precision Instruments, Inc. | PV830 | Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used |
| Micro-manipulator | World Precision Instruments, Inc. | MMJR | Right-handed (MMJL for lefthanded) |
| Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-4 | These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle |
| Needle holder | World Precision Instruments, Inc. | 5430-ALL | Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket |
| Needle puller | Sutter Instrument Co. | P-97 | Other micropipette/needle pullers should also work |
| Microscope | Leica, Nikon, Zeiss | Number varies depending on the manufacturer | Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators |
| 2-Phenoxyethanol | Sigma-Aldrich | 77861-1L | Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia |
Citar este artigo
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).