Iniezione di morfolino: un metodo per abbattere l'espressione genica bersaglio per studiare la funzione in Zebrafish
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hyde D.R., et al. Elettroporazione in vivo di Morpholinos nella pinna posteriore zebrafish adulta rigenerante. J. Vis. Exp. (2012)
Il protocollo descrive l’abbattimento mirato dell’espressione genica nel pesce zebra mediante iniezione di morfolino nella coda.
Protocol
1. Iniezione di morfolino Il giorno prima di iniettare il morfolino, fare una piastra di iniezione (Figura 1). Assicurati di tagliare una tacca ad un’estremità del pozzo, il che aiuta a stabilizzare il pesce per la procedura di microiniezione. Diluire il morfolino taggato con fluoresceina alla giusta concentrazione (si consiglia di iniziare con 1,2 mM) e mettere in un bagno d’acqua a 65 °C, per 5 minuti. Caricare l’ago con il morfolino(nota:</stron…
Representative Results
Figura 1. A. Schema della piastra di iniezione, che è fatta di agarosio e contiene un piccolo pozzo per contenere il pesce durante la microiniezione del morfolino. Figura 2. Schema della microiniezione di morfolino. A. La commissione per l’a Metti il pesce nel piatto con la t…
Materials
| Morpholino | GeneTools, LLC | Morpholino should be custom designed to your protein of interest | |
| Micro-injection pump | World Precision Instruments, Inc. | PV830 | Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used |
| Micro-manipulator | World Precision Instruments, Inc. | MMJR | Right-handed (MMJL for lefthanded) |
| Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-4 | These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle |
| Needle holder | World Precision Instruments, Inc. | 5430-ALL | Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket |
| Needle puller | Sutter Instrument Co. | P-97 | Other micropipette/needle pullers should also work |
| Microscope | Leica, Nikon, Zeiss | Number varies depending on the manufacturer | Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators |
| 2-Phenoxyethanol | Sigma-Aldrich | 77861-1L | Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia |
Citar este artigo
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).