Morpholino Enjeksiyonu: Zebra Balıklarında İşlevi İncelemek İçin Hedef Gen İfadesini Devirme Yöntemi
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Hyde D.R., vd. In vivo Morpholinos’un Yenileyici Yetişkin Zebra Balığı Kuyruk Yüzgecine Elektroporasyon. J. Vis. Exp. (2012)
Protokol, zebra balıklarındaki gen ekspresyonunun kuyruğa morfosin enjeksiyonu ile hedefli olarak nakavt edildiğini açıklar.
Protocol
1. Morfosin Enjeksiyonu Morfolinin enjekte edilmeden bir gün önce, bir enjeksiyon plakası yapın (Şekil 1). Kuyunun bir ucunda, mikroenjeksiyon prosedürü için balığı stabilize etmeye yardımcı olan bir çentik kestiğinize emin olun. Floresan etiketli morfoinoyu uygun konsantrasyonda seyreltin (1,2 mM ile başlamanızı tavsiye eder) ve 5 dakika boyunca 65 °C’lik bir su banyosuna yerleştirin. İğneyi morfoino ile yükleyin(not:…
Representative Results
Şekil 1. A. Agarose’dan yapılan ve morfotin mikroenjeksiyonu sırasında balığı tutmak için küçük bir kuyu içeren enjeksiyon plakasının şeması. Şekil 2. Morfotin mikroenjeksiyon şeması. A. Balıkları, balığın sabit kalmasına yardımcı olacak şekilde kuy…
Materials
| Morpholino | GeneTools, LLC | Morpholino should be custom designed to your protein of interest | |
| Micro-injection pump | World Precision Instruments, Inc. | PV830 | Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used |
| Micro-manipulator | World Precision Instruments, Inc. | MMJR | Right-handed (MMJL for lefthanded) |
| Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-4 | These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle |
| Needle holder | World Precision Instruments, Inc. | 5430-ALL | Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket |
| Needle puller | Sutter Instrument Co. | P-97 | Other micropipette/needle pullers should also work |
| Microscope | Leica, Nikon, Zeiss | Number varies depending on the manufacturer | Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators |
| 2-Phenoxyethanol | Sigma-Aldrich | 77861-1L | Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia |
Citar este artigo
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).