Le protocole décrit le renversement ciblé de l’expression des gènes chez le poisson zèbre par injection de morpholino dans la queue.
Protocol
1. Injection de Morpholino La veille de l’injection du morpholino, faire une plaque d’injection (Figure 1). Assurez-vous de couper une encoche à une extrémité du puits, ce qui aide à stabiliser le poisson pour la procédure de microinjection. Diluer le morpholino marqué fluorescéine à la bonne concentration (recommander de commencer par 1,2 mM) et placer dans un bain d’eau de 65 °C, pendant 5 minutes. Chargez l’aiguille avec le morpholino<str…
Representative Results
Figure 1. A. Schéma de la plaque d’injection, qui est faite à partir d’agarose et contient un petit puits pour retenir le poisson pendant la microinjection du morpholino. Figure 2. Schéma de microinjection morpholino. R. Placez le poisson dans le plat avec la tête du p…
Materials
Morpholino
GeneTools, LLC
Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump
World Precision Instruments, Inc.
PV830
Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator
World Precision Instruments, Inc.
MMJR
Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter
World Precision Instruments, Inc.
1B100F-4
These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder
World Precision Instruments, Inc.
5430-ALL
Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller
Sutter Instrument Co.
P-97
Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope
Leica, Nikon, Zeiss
Number varies depending on the manufacturer
Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol
Sigma-Aldrich
77861-1L
Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).