In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de ratos E16

Abstract

Intra-uterina in vivo de injeção e eletroporação do neocórtex de ratos embrionários fornece uma ferramenta poderosa para a manipulação de células progenitoras individuais que revestem as paredes do ventrículo lateral. Esta técnica é amplamente utilizada para estudar os processos envolvidos na corticogenesis por excesso de expressar ou derrubando genes e observando os efeitos sobre a proliferação celular, migração e diferenciação. Em comparação com as estratégias tradicionais de knockout, in-utero eletroporação fornece um meio rápido para manipular uma população de células durante uma janela específica temporal. Neste protocolo de vídeo, destacamos a metodologia experimental para a preparação para a cirurgia ratos, expondo os cornos uterinos através laporatomy, injetando DNA para os ventrículos laterais do embrião em desenvolvimento, electroporating DNA para os progenitores que revestem a parede lateral, e cuidar de animais de pós- cirurgia. Nosso laboratório utiliza este protocolo para cirurgias em E15-E21 ratos, no entanto, é mais comumente realizada no E16 como mostra este vídeo.