载入果蝇与神经末梢钙指标

Summary

钙是一种在神经系统中无处不在的使者，触发神经递质释放和突触强度的变化。在这里，我们展示了^一个加载的^Ca 2 +指标到果蝇的神经终端的技术。我们也证明所需设备的制造，并强调技术的成功的关键点。

Abstract

钙在神经系统中的许多角色，但没有更令人印象深刻，作为神经递质释放的触发，并没有比支持学习和记忆的突触可塑性的重要使者深刻。为了进一步阐明的分子基础的Ca ^{2 +}依赖的突触机制，需要一个模型系统，基因可塑性和生理访问。果蝇提供了这样一个模型。在这个系统中，基因编码的荧光指标，可用来检测^神经末梢的Ca ² +的变化。然而，这些指标是有限的敏感性^钙+和常常表现出非线性响应。合成荧光指标更适合于测量迅速的Ca ^{2 +}与神经活动有关的变化。在这里，我们展示了一个加载到果蝇幼虫生活的神经末梢^葡聚糖偶联合成的Ca 2 +指标的技术。特别强调的是放置在协议的那些方面最关键该技术的成功，例如如何以避免沿的隔离神经静电，保持编制的健康在扩展装载期间，，并确保轴突^生存提供的^Ca 2 +促进密封切断轴突末梢。低亲和力右旋糖酐标记的Ca ^{2 +}的指标，如氟- 4和rhod，这显示了一个高信号的信噪比，同时微创干扰^突触前的^{Ca 2} +动力学。葡聚糖共轭有助于防止^钙进入细胞器如线粒体扣押⁺指标。加载技术可以同样适用于幼虫，胚胎和成人。

Protocol

选择一个干净的清扫菜，没有接触过任何固定液。 解剖流浪3 路龄果蝇在施耐德的果蝇含有钙的中等幼虫+和L -谷氨酰胺，（不削减任何神经或损伤肌纤维第7，6，13或12） 。 选择一个12微米的小费（内径）的玻璃灌装吸管。 使用注射器和油管（应用负压吸管）确保不妨碍枪头。 选择一个优良的塑料填充丝可插入玻璃吸管?…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Schneider’s Insect Medium	Reagent	Sigma	S0146	must contain L-glutamine and calcium
L-glutamic acid monosodium salt hydrate	Reagent	Sigma	G1626