Загрузка дрозофилы нервными окончаниями с кальцием Индикаторы
Summary
Кальций является вездесущий посланник в нервной системы, необходимой для запуска выпуска нейротрансмиттера и изменения в синаптической силы. Здесь мы показываем, технику для погрузки Са 2 +-индикаторы в терминалах дрозофилы нерва. Мы также демонстрируют изготовление необходимых приборов и подчеркнуть точки решающее значение для успеха этой техники.
Abstract
Кальций играет много ролей в нервной системе, но ни один более впечатляющим, чем в качестве триггера для выпуска нейротрансмиттера, и никто более глубоким, чем в качестве посланника необходимо для синаптической пластичности, поддерживающего обучения и памяти. Для дальнейшего выяснения молекулярной основы Са 2 +-зависимые синаптических механизмов, модели требуется система, которая является и генетически ковкого и физиологически доступной. Дрозофилы предоставляет такую модель. В этой системе, генетически закодированы люминесцентные индикаторы доступны для выявления Са 2 + изменения в нервных окончаниях. Тем не менее, эти показатели имеют ограниченные чувствительность к Са 2 + и часто показывают нелинейную реакцию. Синтетические люминесцентные индикаторы лучше подходят для измерения быстрых Са 2 + изменения, связанные с нервной активностью. Здесь мы показываем, технику для погрузки декстран-сопряженных синтетического Ca 2 + показатели в живых нервных окончаний у личинок дрозофилы. Особый акцент делается на тех аспектах протокол наиболее решающее значение для успеха этой техники, например, как избежать статических разрядов электричества вдоль изолированных нервов, поддержании здоровья подготовки в течение длительных периодов погрузки, а также обеспечение аксон выживание, предоставляя Са 2 + содействовать уплотнения разорвала окончаниях аксона. Низкое сродство декстран-сопряженных Са 2 +-индикаторы, такие как флуоресцентные-4 и rhod, доступны, которые показывают высокое отношение сигнал-шум в то время как минимально нарушая пресинаптических Са 2 + динамики. Декстран сопряжения помогает предотвратить Са 2 + показатели, поглощенных в органеллах типа митохондрий. Погрузка техника может быть применена в равной степени к личинки, эмбрионы и взрослых.
Protocol
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Schneider’s Insect Medium | Reagent | Sigma | S0146 | must contain L-glutamine and calcium |
| L-glutamic acid monosodium salt hydrate | Reagent | Sigma | G1626 |
Referências
- Macleod, G. T., Hegstrom-Wojtowicz, M., Charlton, M. P., Atwood, H. L. Fast calcium signals in Drosophila motor neuron terminals. J. Neurophysiol. 88, 2659-2663 (2002).
- Macleod, G. T., Suster, M. L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. Single neuron activity in the Drosophila larval CNS detected with calcium indicators. J. Neurosci. Methods. 127, 167-178 (2003).
- Macleod, G. T., Marin, L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. Synaptic vesicles: test for a role in presynaptic calcium regulation. J. Neurosci. 24, 2496-2505 (2004).
- Reiff, D. F., Thiel, P. R., Schuster, C. M. Differential regulation of active zone density during long-term strengthening of Drosophila neuromuscular junctions. J. Neurosci. 22, 9399-9409 (2002).
- Reiff, D. F., Ihring, A., Guerrero, G., Isacoff, E. Y., Joesch, M., Nakai, J., Borst, A. In vivo performance of genetically encoded indicators of neural activity in flies. J. Neurosci. 25, 4766-4778 (2005).
