Caricamento terminazioni nervose Drosophila con gli indicatori di calcio
Summary
Il calcio è un messaggero onnipresente nel sistema nervoso, essenziale per innescare il rilascio dei neurotrasmettitori e dei cambiamenti nella forza sinaptica. Qui mostriamo una tecnica per il caricamento di Ca 2 +-indicatori in terminazioni nervose Drosophila. Abbiamo anche dimostrare fabbricazione degli apparati necessari e sottolineare i punti critici per il successo della tecnica.
Abstract
Il calcio gioca molti ruoli nel sistema nervoso, ma nessuno più impressionante come trigger per il rilascio dei neurotrasmettitori, e nessuno più profonda di come il messaggero essenziali per la plasticità sinaptica, che supporta l'apprendimento e la memoria. Per ulteriormente chiarire le basi molecolari di Ca 2 +-dipendente meccanismi sinaptici, un sistema modello è necessario che sia geneticamente malleabile e fisiologicamente accessibile. Drosophila melanogaster fornisce un tale modello. In questo sistema, gli indicatori fluorescenti geneticamente codificate sono a disposizione per rilevare Ca 2 + variazioni di terminazioni nervose. Tuttavia, questi indicatori hanno limitato la sensibilità al Ca 2 + e mostrano spesso una risposta non lineare. Sintetici indicatori fluorescenti sono più adatti per misurare la rapida Ca 2 + cambiamenti associati con l'attività del nervo. Qui mostriamo una tecnica per il caricamento destrano coniugato sintetico Ca 2 + indicatori in terminali nervosi larve vivono in Drosophila. Particolare enfasi è posta sugli aspetti del protocollo più critico per il successo della tecnica, come il modo di evitare scariche di elettricità statica lungo i nervi isolato, il mantenimento della salute della preparazione durante i periodi di carico prolungato, e di garantire la sopravvivenza degli assoni, fornendo Ca 2 + per la promozione di tenuta delle terminazioni degli assoni reciso. Bassa affinità destrano coniugato Ca 2 +-indicatori, come fluo-4 e Rhod, sono disponibili che mostrano un elevato rapporto segnale-rumore mentre minimamente disturbare presinaptico Ca 2 + dinamica. Destrano-coniugazione aiuta a prevenire Ca 2 + indicatori essere sequestrato in organuli come i mitocondri. La tecnica di carico può essere applicato anche per le larve, gli embrioni e adulti.
Protocol
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Schneider’s Insect Medium | Reagent | Sigma | S0146 | must contain L-glutamine and calcium |
| L-glutamic acid monosodium salt hydrate | Reagent | Sigma | G1626 |
Referências
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