Kalsiyum Göstergeleri ile yükleme Drosophila Sinir Terminalleri
Summary
Kalsiyum sinir sistemi her yerde bulunan bir haberci, sinaptik gücü nörotransmitter salınımı ve değişiklikleri tetiklenmesi için gerekli. Burada Ca 2 +-göstergeler Drosophila sinir uçları içine yüklemek için bir teknik göstermektedir. Biz de gerekli aparat imalatı göstermek ve tekniğinin başarısı için kritik noktaları vurgulamak.
Abstract
Kalsiyum sinir sistemi birçok roller oynar ama hiçbiri nörotransmitter serbest bırakılması için tetikleyici olarak daha etkileyici ve sinaptik plastisite, öğrenme ve hafıza destekler için gerekli elçi olarak daha hiçbiri daha derin. Ca 2 moleküler temellerinin daha da aydınlatmak için +-bağımlı sinaptik mekanizmalar, genetik uysal ve fizyolojik olarak erişilebilir bir model sistem olması gereklidir . Drosophila melanogaster böyle bir model sağlar. Bu sistemde, sinir uçlarında Ca 2 + değişiklikleri tespit etmek için genetik olarak kodlanmış floresan göstergeler mevcuttur. Ancak, bu göstergeler Ca 2 duyarlılık sınırlı + ve genellikle doğrusal olmayan bir tepki göstermek. Sentetik floresan göstergeler daha iyi, hızlı bir şekilde Ca 2 + sinir aktivitesi ile ilişkili değişiklikler ölçmek için uygundur. Burada Drosophila larvaları canlı sinir terminallerine dekstran-konjuge sentetik Ca 2 + göstergeleri yükleme için kullanılan bir tekniktir göstermektedir. Özellikle vurgu hazırlık sağlığı devamlılığının uzun yükleme dönemleri sırasında sağlanması bakımından, izole sinirler boyunca statik elektrik deşarjları önlemek için ne gibi, tekniği Kullanıcı başarısı için en kritik protokolün bu yönleri üzerine yerleştirilir, ve Ca 2 sağlayan akson hayatta kalma sağlanması . + kopmuş akson uçlarının sızdırmazlık teşvik. Düşük afiniteli dekstran-konjuge fluo-4 ve rhod + göstergeleri, Ca 2 + dinamikleri presinaptik Ca 2 kesintiye minimal yüksek sinyal-gürültü oranı gösteren mevcuttur. Dekstran-konjugasyon Ca 2 + göstergeleri gibi mitokondri gibi organellerin içinde sekestre önlemeye yardımcı olur. Larvaları, embriyoları ve yetişkinler için eşit yükleme tekniği uygulanabilir.
Protocol
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Schneider’s Insect Medium | Reagent | Sigma | S0146 | must contain L-glutamine and calcium |
| L-glutamic acid monosodium salt hydrate | Reagent | Sigma | G1626 |
Referências
- Macleod, G. T., Hegstrom-Wojtowicz, M., Charlton, M. P., Atwood, H. L. Fast calcium signals in Drosophila motor neuron terminals. J. Neurophysiol. 88, 2659-2663 (2002).
- Macleod, G. T., Suster, M. L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. Single neuron activity in the Drosophila larval CNS detected with calcium indicators. J. Neurosci. Methods. 127, 167-178 (2003).
- Macleod, G. T., Marin, L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. Synaptic vesicles: test for a role in presynaptic calcium regulation. J. Neurosci. 24, 2496-2505 (2004).
- Reiff, D. F., Thiel, P. R., Schuster, C. M. Differential regulation of active zone density during long-term strengthening of Drosophila neuromuscular junctions. J. Neurosci. 22, 9399-9409 (2002).
- Reiff, D. F., Ihring, A., Guerrero, G., Isacoff, E. Y., Joesch, M., Nakai, J., Borst, A. In vivo performance of genetically encoded indicators of neural activity in flies. J. Neurosci. 25, 4766-4778 (2005).
