Loading Drosophila Nerve Terminals mit Calcium-Indikatoren
Summary
Calcium ist ein allgegenwärtiges Botenstoff im Nervensystem, wichtig für die Auslösung die Freisetzung von Neurotransmittern und Veränderungen der synaptischen Stärke. Hier zeigen wir eine Technik zum Be-Ca 2 +-Indikatoren in Drosophila Nervenendigungen. Wir zeigen auch die Herstellung der erforderlichen Geräte und betonen Punkte von entscheidender Bedeutung für die Technik für den Erfolg.
Abstract
Calcium spielt viele Rollen im Nervensystem aber keiner eindrucksvoller als als Auslöser für die Freisetzung von Neurotransmittern, und niemand tiefer als wie der Bote essentiell für die synaptische Plastizität, dass Lernen und Gedächtnis unterstützt. Zur weiteren Aufklärung der molekularen Grundlagen der Ca 2 +-abhängige synaptische Mechanismen, ist ein Modell-System benötigt, das sowohl genetisch formbar und physiologisch zugänglich. Drosophila melanogaster bietet ein solches Modell. In diesem System sind genetisch kodierte fluoreszierende Indikatoren zur Verfügung Ca 2 + Änderungen in Nervenendigungen zu erkennen. Allerdings haben diese Indikatoren Empfindlichkeit gegenüber Ca 2 + beschränkt und zeigen oft ein nicht-lineares Ansprechverhalten. Synthetische fluoreszierenden Indikatoren sind besser für die Messung der schnellen Ca 2 + ändert sich mit Nerven-Aktivität assoziiert geeignet. Hier zeigen wir eine Technik zum Be-Dextran-konjugierten synthetischen Ca 2 +-Indikatoren in den Live-Nervenendigungen in Drosophila-Larven. Besonderes Augenmerk wird auf jene Aspekte des Protokolls am wichtigsten für die Technik für den Erfolg, wie, wie elektrostatische Entladungen entlang der isolierten Nerven zu vermeiden, die Erhaltung der Gesundheit der Zubereitung bei längeren Ladezeiten gelegt, und die Gewährleistung Axon Überleben durch Ca 2 + zur Förderung der Abdichtung von abgetrennten Axonendigungen. Geringe Affinität Dextran-konjugierten Ca 2 +-Indikatoren, wie Fluo-4 und rhod, zur Verfügung, die ein hohes Signal-Rausch-Verhältnis zu zeigen, während minimal stören präsynaptischen Ca 2 + Dynamik. Dextran-Konjugation hilft zu verhindern, Ca 2 +-Indikatoren werden in Organellen wie Mitochondrien sequestriert. Die Belastung Technik kann auch für Larven, Embryonen und Erwachsenen angewendet werden.
Protocol
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Schneider’s Insect Medium | Reagent | Sigma | S0146 | must contain L-glutamine and calcium |
| L-glutamic acid monosodium salt hydrate | Reagent | Sigma | G1626 |
Referências
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