סידן הוא שליח בכל מקום במערכת העצבים, חיוני מפעילה שחרור הנוירוטרנסמיטר ושינויים חוזק סינפטי. כאן אנו להפגין טכניקה לטעינת Ca 2 +-אינדיקטורים לתוך מסופי תסיסנית עצב. אנחנו גם מדגימים המצאה של המנגנון הנדרש ולהדגיש נקודות קריטיות להצלחת הטכניקה.
Abstract
סידן משחק תפקידים רבים במערכת העצבים אבל אף מרשים יותר כמו ההדק לשחרור נוירוטרנסמיטר, ואף אחד עמוק יותר כשליח חיוני הפלסטיות הסינפטית התומכת בלמידה ובזיכרון. כדי להמשיך להבהיר את הבסיס המולקולרי של Ca 2 + תלויי מנגנוני הסינפטי, מערכת מודל נדרש כי הוא גם נזיל גנטית נגיש מבחינה פיזיולוגית. תסיסנית melanogaster מספק מודל כזה. במערכת זו, מקודדים גנטית אינדיקטורים פלורסנט זמינים לזהות Ca 2 + שינויים מסופי העצב. עם זאת, אינדיקטורים אלה מוגבל רגישות Ca 2 + ולעתים קרובות להראות תגובה שאינו ליניארי. האינדיקטורים פלורסנט סינתטי מתאימים יותר למדידת Ca מהירה 2 + שינויים הקשורים לפעילות עצבית. כאן אנו להפגין טכניקה לטעינת dextran-מצומדות סינתטי Ca 2 + אינדיקטורים לתוך מסופי העצב לחיות הזחלים תסיסנית. דגש מיוחד מושם על אותם היבטים של פרוטוקול הקריטי ביותר להצלחה של טכניקה, כמו למשל איך להימנע הפרשות חשמל סטטי לאורך עצבים מבודדת, בשמירה על בריאות הכנת בתקופות טעינה ממושכת, והבטחת הישרדות האקסון ידי מתן Ca 2 + כדי לקדם את האיטום של קצות האקסון ניתק. זיקה נמוכה dextran-מצומדות Ca 2 +-אינדיקטורים, כגון fluo-4 ו rhod, זמינים אשר מראים יחס גבוה אות לרעש בזמן מינימלית לשבש presynaptic Ca 2 + דינמיקה. Dextran-נטיה מסייע במניעת Ca 2 + אינדיקטורים להיות מוחרם לתוך אברונים כגון מיטוכונדריה. הטכניקה הטעינה יכול להיות מיושם באופן שווה, הזחלים עוברים ומבוגרים.
Protocol
בחר מנה לנתיחה נקי כי לא נחשף כל fixatives. לנתח נודד 3 rd instar הזחל תסיסנית בינוני של שניידר תסיסנית המכילה Ca 2 + ו-L-גלוטמין, (לא לחתוך שום עצבים או שרירים סיבי נזק מס '7, 6, 13 או 12). בחר …