تعيش تشريح ذبابة الفاكهة الأجنة : طرق مبسطة للفحص من قبل مجموعات المسخ تلطيخ جسم
Summary
وصفنا بروتوكول مبسط لتوليد "فيليه" الاستعدادات للأجنة ذبابة الفاكهة من المورثات المحددة. هذا البروتوكول يسمح التنفيذ الفعال لمجموعة متنوعة من شاشات الجينية. كما يسمح التصور ممتازة الهياكل في الجنين في وقت متأخر.
Abstract
يمكن أجنة ذبابة الفاكهة بين 14 و 17 مراحل من التطور الجنيني تشريح بسهولة لتوليد "فيليه" الاستعدادات. في هذه الاستعدادات ، والنظام العصبي المركزي يعمل في منتصف أسفل ، ويحيط بها جدران الجسم. وقد تم فحص الظواهر المختلفة باستخدام العديد من هذه التحضيرات. في معظم الحالات ، كانت ولدت من قبل شرائح تشريح جسم الملطخة الأجنة كلها جبل ثابت. هذه "تشريح الثابتة" لدينا بعض العيوب ، ولكن. فهي تستغرق وقتا طويلا للتنفيذ ، وأنه من الصعب فرز متحولة (GFP سلبية) الأجنة من المخزونات التي يحتفظ بها في أكثر من طفرات الكروموسومات موازن GFP. منذ عام 2002 ، تم إجراء مجموعتنا عوز وشاشات التعبير خارج الرحم لتحديد يغاندس لمستقبلات اليتيم. طورنا من أجل القيام بذلك ، وبروتوكولات مبسطة لتشريح الجنين يعيش وتلوين الأجسام المضادة للمجموعات التي تحتوي على مئات من خطوط متوازنة. لقد استنتجنا أنه أكثر كفاءة بكثير لدراسة الظواهر في مجموعات كبيرة من الاسهم عن طريق تشريح حية من قبل تشريح الثابتة. باستخدام بروتوكول صفها هنا ، يمكن لفرد واحد المدربين الشاشة تصل إلى 10 خطا لكل يوم لمدة الظواهر ، ودراسة الأجنة 4-7 متحولة من كل سطر تحت المجهر المركب. وهذا يسمح بتحديد الطفرات منح خفية ، منخفضة انتفاذ الظواهر ، حيث يتم تسجيل ما يصل إلى 70 في كل سطر في hemisegments التكبير مع عدسة عالية للمياه الغمر 40X.
Protocol
Discussion
نأمل أن تكون هذه التظاهرة عرض الفيديو وأساليبنا لتشريح الجنين يعيش وتلطيخ بتفصيل كاف أنه يمكن الآن أن يتم تنفيذها بسهولة من قبل أي شخص لديه بعض الخبرة في مجال علم الوراثة وعلم الأجنة ذبابة الفاكهة. بالطبع ، لا يزال كبيرا الممارسة يكون مطلوبا ، في المقام الأول لت?…
Acknowledgements
نشكر نيكي فوكس وشميد ألويزيا لمساهماتها في تطوير هذه البروتوكولات. وأيد هذا العمل عن طريق منحة المعاهد الوطنية للصحة لRO1 KZ ، NS28182.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Borosilicate Tubing With Filament | Sutter Instrument | BF120-60-10 | ||
| Narishige model PC-10 needle puller | Narishige | Tubes pulled using a heater level of 58.9 |
References
- Patel, N. H. Imaging neuronal subsets and other cell types in whole-mount Drosophila embryos and larvae using antibody probes. Methods Cell Biol. 44, 445-487 (1994).
- Desai, C. J., Gindhart, J. G., Goldstein, L. S., Zinn, K. Receptor tyrosine phosphatases are required for motor axon guidance in the Drosophila embryo. Cell. 84, 599-609 (1996).
- Sun, Q., Schindelholz, B., Knirr, M., Schmid, A., Zinn, K. Complex genetic interactions among four receptor tyrosine phosphatases regulate axon guidance in Drosophila. Molecular and cellular neurosciences. 17, 274-291 (2001).
- Schmid, A., Schindelholz, B., Zinn, K. Combinatorial RNAi: a method for evaluating the functions of gene families in Drosophila. Trends in neurosciences. 25, 71-74 (2002).
- Fox, A. N., Zinn, K. The heparan sulfate proteoglycan syndecan is an in vivo ligand for the Drosophila LAR receptor tyrosine phosphatase. Curr Biol. 15, 1701-1711 (2005).
