果蝇聚乙烯南瓜抗体标记染色体的制备
Summary
该视频协议说明在约翰森实验室中使用的壁球技术准备<em>果蝇</em>聚乙烯抗体标记染色体。
Abstract
果蝇一直喜爱的模型系统研究由于聚乙烯染色体三龄幼虫的巨大唾液腺提供细胞学优势的染色质结构和基因调控之间的关系。在这个组织中的染色体在细胞分工上升到约1000份的情况下进行多轮的复制。的DNA仍然大大扩大提供一个独特的机会，到相关的特定蛋白质的本地化染色质形态的染色体复制后每个周期相一致。因此，出现了一个高水平的界定目前在不同的基因的表观遗传修饰和转录过程的不同阶段的兴趣。为此类研究的重要工具，是与抗体的酶标记的聚乙烯染色体，转录因子，或感兴趣的组蛋白修饰。这个视频协议说明，在约翰森实验室用于制备抗体标记果蝇多线染色体的壁球技术。
Protocol
聚乙烯染色体壁球准备以下协议是改编自约翰森等人所描述的程序。 （2009年）。 1。文化的第三龄果蝇幼虫为了获得高品质壁球制剂的最佳聚乙烯染色体，拥挤的培养条件是必不可少的（即大约20个鸡蛋在一个标准的4个“飞瓶和变化到一个新的瓶子铺设雌性果蝇每天），选择最胖的个人从第一次攀登，而他们仍然徘徊，但只是到化蛹前幼虫3?…
Discussion
包含在传统壁球固定协议的醋酸和乳酸，有利于带间的决议和染色体臂蔓延，但不幸的是，一些抗原决定簇不生存之本治疗。这样一个抗原表位的一个例子是H3S10ph（ 蔡等 ，2008） 。由于酸的治疗也有它的缺点是淬火GFP标记的蛋白质，DiMario等固有荧光。 （2006年）最近开发的基于甲醛的“无酸壁球技术”，允许无酸敏感的抗原决定簇的抗体检测GFP抗体标记以及GFP融合蛋白聚乙烯染色?…
Acknowledgements
我们感谢五Lephart女士维护飞生补助金（GM62916）和国家科学基金会的资助（MCB0817107），这项工作是由国家机构支持的股票。
References
- Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila. Development. 135, 2917-2925 (2008).
- DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes. Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).
- Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies. Methods. 48, 387-397 (2009).
Cite This Article
Cai, W., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling. J. Vis. Exp. (36), e1748, doi:10.3791/1748 (2010).