Preparación de los cromosomas politénicos de Drosophila Calabazas para el Etiquetado de anticuerpos
Summary
Este protocolo de vídeo muestra la técnica de squash utilizados en el laboratorio para preparar Johansen<em> Drosophila</em> Cromosomas politénicos para el etiquetado de anticuerpos.
Abstract
Drosophila ha sido durante mucho tiempo un sistema modelo preferido para el estudio de la relación entre la estructura de la cromatina y la regulación de genes debido a las ventajas citológico siempre por el gigante de los cromosomas politénicos de las glándulas salivales de las larvas. En este tejido se someten a los cromosomas de muchas rondas de replicación en la ausencia de división celular que da lugar a unas 1000 copias. El ADN permanece alineado después de cada ciclo de replicación de los cromosomas que resulta muy ampliado que proporcionan una oportunidad única para relacionar la morfología de la cromatina con la localización de proteínas específicas. En consecuencia, ha habido un alto nivel de interés en la definición de las modificaciones epigenéticas presentes en genes diferentes y en diferentes etapas del proceso de transcripción. Una herramienta importante para estos estudios es el etiquetado de los cromosomas politénicos con anticuerpos frente a la enzima, el factor de transcripción, o modificación de las histonas de interés. Este protocolo de vídeo muestra la técnica de squash utilizados en el laboratorio para preparar Johansen Drosophila cromosomas politénicos para el etiquetado de anticuerpos.
Protocol
Discussion
La inclusión de los ácidos acético y láctico en los protocolos convencionales de squash fijación facilita tanto la resolución interbandas y brazo cromosómico de propagación, pero, lamentablemente, algunos epítopos no sobreviven a este tratamiento. Un ejemplo de este tipo es un epítopo H3S10ph (Cai et al., 2008). Dado que el tratamiento con ácido también tiene la desventaja de que apaga la fluorescencia intrínseca de las buenas prácticas agrarias de etiquetado proteínas, DiMario et al. (2…
Acknowledgements
Agradecemos a la Sra. V. Lephart para el mantenimiento de poblaciones de moscas Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud de subvención (GM62916) y la National Science Foundation (MCB0817107).
References
- Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila. Development. 135, 2917-2925 (2008).
- DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes. Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).
- Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies. Methods. 48, 387-397 (2009).
