Antikor Etiketleme Drosophila politen Kromozom kabak hazırlanması
Summary
Bu video protokol hazırlamak için Johansen laboratuvarında kullanılan kabak tekniği göstermektedir.<em> Drosophila</em> Antikor etiketleme politen kromozom.
Abstract
Drosophila uzun, kromatin yapısı ve üçüncü instar larvaların dev tükürük bezi politen kromozom tarafından sağlanan sitolojik avantajları nedeniyle gen regülasyonu arasındaki ilişkiyi çalışmak için favori bir model sistem olmuştur. Bu doku kromozomların yaklaşık 1000 kopya yol açan hücre bölünmesi yokluğunda çoğaltma çok sayıda mermi uğrarlar. DNA spesifik protein lokalizasyonu ile kromatin morfolojisi ilişkilendirmek için eşsiz bir fırsat sunan büyük ölçüde genişlemiş kromozom sonuçlanan her replikatif döngüsü sonra dizilen kalır. Sonuç olarak, farklı genlerin epigenetik değişiklikleri tanımlamada ve transkripsiyon sürecinin farklı aşamalarında yüksek düzeyde ilgi olmamıştır. Bu tür çalışmalar için önemli bir araç politen kromozom enzim antikorları ile etiketleme, transkripsiyon faktörü, ya da ilgi histon modifikasyonu. Bu video protokolü antikor etiketlenmesi için Drosophila politen kromozom hazırlamak için Johansen laboratuvarında kullanılan kabak tekniği göstermektedir.
Protocol
Discussion
Geleneksel kabak tespit protokollerinde asetik ve laktik asitler dahil, yayılmasını bantlar çözünürlük ve kromozomal kol kolaylaştırır ama ne yazık ki, bazı epitoplar bu tedavi hayatta yok. Böyle bir epitopu bir örnek H3S10ph (Cai ve ark, 2008). Asit tedavisi de GFP etiketli proteinler, DiMario ve ark doğasında floresan doyurur dezavantajı vardır. (2006) son zamanlarda aside duyarlı epitoplar antikor tespiti için GFP-antikor etiketleme gibi politen kromozom GFP-füzyon proteinine d…
Acknowledgements
Bayan V. Lephart Biz Bu çalışma, Sağlık hibe (GM62916) ve Ulusal Bilim Vakfı hibe (MCB0817107) Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenen sinek stokları bakım için teşekkür ederim.
References
- Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila. Development. 135, 2917-2925 (2008).
- DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes. Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).
- Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies. Methods. 48, 387-397 (2009).
