Non-Terminal Bloedafname Technieken in Guinea Pigs
Summary
Hoewel een bekend model, de cavia vertegenwoordigt momenteel een niche in experimentele dierwetenschappen en beperkte gegevens beschikbaar over de uitvoering van de meeste procedures. Hier presenteren we vier verschillende benaderingen van non-terminal in vivo bloedafname technieken in ofwel bewust of verdoofd cavia.
Abstract
Cavia's hebben verschillende biologische overeenkomsten met de mens en zijn gevalideerd experimentele diermodellen 1-3. Echter, het gebruik van cavia's is nog een relatief smal gebied van onderzoek en beschrijvende data op specifieke methodologie dienovereenkomstig schaars. De anatomische kenmerken van cavia's zijn iets anders dan andere knaagdieren modellen, vandaar de modulatie van steekproeven om tegemoet te soortspecifieke verschillen, bijvoorbeeld., In vergelijking met muizen en ratten, zijn noodzakelijk om voldoende en kwalitatief hoogwaardige monsters. Aangezien zowel lange en korte termijn in vivo studies vereisen vaak herhaalde bloedafname de keuze van de techniek moet goed worden overwogen, om stress en ongemak te verminderen bij de dieren, maar ook om te overleven, evenals de naleving van de eisen van de steekproefgrootte en de toegankelijkheid te waarborgen. Veneuze bloedmonsters kunnen worden verkregen bij een aantal sites bij cavia's bijvoorbeeld., De vena jugularis enaders, elke techniek die zowel voordelen als nadelen 4,5. Hier presenteren we vier verschillende bloedafname technieken voor zowel bewust of verdoofd cavia. De procedures zijn alle niet-terminale procedures die sample volumes en aantal monsters niet richtlijnen voor bloedafname niet hoger zijn dan bij proefdieren 6. Alle beschreven methoden zijn uitvoerig getest en toegepast voor herhaalde in vivo bloedafname in studies binnen onze onderzoeksfaciliteit.
Introduction
De cavia is een waardevol en gevalideerd proefdiermodel door een aantal biologische band mens zoals een vereiste voor een voedingsbron te voorzien van vitamine C, vergelijkbaar plasma lipoproteïne enzymen en lipoproteïne profiel, en gedeeld overeenkomsten met menselijke placenta en prenatale ontwikkeling 1-3,7,8. Dit maakt de cavia een aantrekkelijke en geschikte model voor het bestuderen van effecten van dieet geassocieerde ziekten zoals niet-alcoholische vette leverziekte, cardiovasculaire aandoeningen en vermeende effecten van vitamine C-tekort kan ook de werking van bijvoorbeeld. Maternale interventie voeding op de ontwikkeling nakomelingen.
Herhaalde bloedafname is vaak nodig in zowel de korte en lange termijn in vivo studies. Vanwege soortspecifieke anatomische verschillen modulatie van de steekproeftechniek noodzakelijk om bloedmonsters in cavia's in vergelijking met andere diermodellen verkrijgen <sup> 4,5. Dit omvat variatie in de loop van aders en slagaders, en dat cavia geen staart aannemen, derhalve verschillende eisen en opties voor zowel bemonstering en handling. Bemonstering van de vena of tarsale ader, induceert minimaal ongemak en stress bij het dier en vereist geen verdoving 3,9. Deze techniek maakt herhaalde monsters van kleine hoeveelheden bloed (100-400 ul), bijvoorbeeld., Biochemische merkers in plasma te bepalen. Als een nog kleinere steekproefomvang voldoende is (50-100 ul), dit kan heel gemakkelijk worden verkregen door het aanprikken van de oorader. Deze techniek kan ook bij dieren bij bewustzijn uitgevoerd en is bijvoorbeeld nuttig bij het meten van bloedglucose 10,11. Bemonstering van de halsader maakt verzamelen van grotere hoeveelheden bloed (1-2 ml) maar vereist verdoving.
Hier presenteren we vier verschillende bloedafname technieken voor zowel bewust of verdoofd cavia. De procedures zijn alle niet-terminale procedures die sample volumes en aantal monsters niet richtlijnen voor bloedafname niet hoger zijn dan bij proefdieren 6. Het is in het belang van goede wetenschap en het welzijn van dieren dat stress tot een minimum moet worden beperkt. Daarom alleen goed opgeleide en bevoegde persoonlijk moet het dier uit te voeren.
Protocol
Representative Results
Discussion
Vergeleken met muizen en ratten, cavia's zijn bang door de natuur en moet rustig worden benaderd en omgang met het oog op het verminderen van stress. Vanuit dierenwelzijn oogpunt handelen met zorg is natuurlijk een prioriteit; echter, zal dit ook het risico van angst geassocieerde effecten van de verzamelde gegevens bijvoorbeeld te verlagen. verhoogde bloedspiegels van corticosteroïden en glucose 12. Ook zal de dagelijkse afhandeling van de dieren wennen aan de normale procedures en kan dienen o…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wij erkennen de bekwame hulp van Annie B. Kristensen, Elisabeth V. Andersen, Belinda B. Bringtoft en de dierverzorgers op de afdeling Experimentele Geneeskunde, Frederiksberg Campus, Faculteit Gezondheid en Medische Wetenschappen, Universiteit van Kopenhagen, Denemarken. Jacob Lønholdt wordt bedankt voor zijn uitstekende technische bijstand bij het filmen van de procedures. Dit onderzoek werd mede ondersteund door de LIFEPHARM Centrum voor in vivo farmacologie en de Universiteit van Kopenhagen.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Electric shaver | Wella (Contura), Denmark | 273207 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Syringes | B.Braun-Omnifix-F, Germany | 9161406V | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Needles | BD Microlance,Spain | 301156 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Microvette collection tube | Sarstedt, D-51588Nümbrecht, Germany | 201,288,100 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Accu-Check analyzer | Roche A/S Diagnostics, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Heparin 5000 IE/ml | LEO Pharma, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Zoletil 50, Chemvet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Neutral eye ointment | Alternative product may be used. Multiple suppliers | ||
| Gauze or a cotton swab | Alternative product may be used. Multiple suppliers | ||
| Disinfectant (70% alcohol) | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
References
- DeOgburn, R., et al. Effects of increased dietary cholesterol with carbohydrate restriction on hepatic lipid metabolism in Guinea pigs. Comp.Med. 62 (2), 109-115 (2012).
- Fernandez, M., Volek, J. S. Guinea pigs a suitable animal model to study lipoprotein metabolism, atherosclerosis and inflammation. Nutr Metab (Lond). 3 (17), (2006).
- Frikke-Schmidt, H., Tveden-Nyborg, P., Birck, M. M., Lykkesfeldt, J. High dietary fat and cholesterol exacerbates chronic vitamin C deficiency in guinea pigs. Br J Nutr. 105 (1), 54-61 (2011).
- Hem, A., Smith, A. J., Solberg, P. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Lab Anim. 32 (4), 364-368 (1998).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Guillen, J. FELASA guidelines and recommendations. J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 311-321 (2012).
- Ye, P., Cheah, I. K., Halliwell, B. High fat diets and pathology in the guinea pig Atherosclerosis or liver damage. Biochim Biophys Acta. 1832 (2), 355-364 (2013).
- Tveden-Nyborg, P., et al. Maternal vitamin C deficiency during pregnancy persistently impairs hippocampal neurogenesis in offspring of guinea pigs. PLoS One. 7 (10), 12-18391 (2012).
- Schjoldager, J. G., Tveden-Nyborg, P., Lykkesfeldt, J. Prolonged maternal vitamin C deficiency overrides preferential fetal ascorbate transport but does not influence perinatal survival in guinea pigs. Br J Nutr. 110 (9), 1573-1579 (2013).
- Greulich, S., et al. Secretory products of guinea pig epicardial fat induce insulin resistance and impair primary adult rat cardiomyocyte function. J Cell Mol Med. 15 (11), 2399-2410 (2011).
- Swifka, J., Weiss, J., Addicks, K., Eckel, J., Rosen, P. Epicardial fat from guinea pig a model to study the paracrine network of interactions between epicardial fat and myocardium. Cardiovasc Drugs Ther. 22 (2), 107-114 (2008).
- Pilny, A. A. Clinical hematology of rodent species. Vet.Clin North Am Exot Anim Pract. 11 (3), 523-vii (2008).
- Franco, N. H., Olsson, I. A. Scientists and the 3Rs: attitudes to animal use in biomedical research and the effect of mandatory training in laboratory animal science. Lab Anim. 48 (1), 50-60 (2014).
- Van, L. J., et al. eAssessing the application of the 3Rs a survey among animal welfare officers in The Netherlands. Lab Anim. 47 (3), 210-219 (2013).
- Sloan, R. C., et al. High doses of ketamine-xylazine anesthesia reduce cardiac ischemia-reperfusion injury in guinea pigs. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (3), 349-354 (2011).
- Jacobson, C. A. A novel anaesthetic regimen for surgical procedures in guinea pigs. Lab Anim. 35 (3), 271-276 (2001).
- Saha, J. K., Xia, J., Grondin, J. M., Engle, S. K., Jakubowski, J. A. Acute hyperglycemia induced by ketamine xylazine anesthesia in rats mechanisms and implications for preclinical models. Exp Biol Med(Maywood). 230 (10), 777-784 (2005).
