Nicht-Terminal-Blut-Stichprobenverfahren bei Meerschweinchen
Summary
Obwohl ein bekanntes Modell, stellt das Meerschweinchen noch eine Nische in der experimentellen Tierforschung und der begrenzten Daten über die Ausführung der meisten Verfahren zur Verfügung. Hier präsentieren wir Ihnen vier verschiedene Ansätze, um Nicht-Terminal in vivo Blutentnahme Techniken entweder bewusst oder betäubt Meerschweinchen.
Abstract
Meerschweinchen besitzen mehrere biologische Ähnlichkeiten zum Menschen und experimentellen Tiermodellen validiert 1-3. Allerdings ist die Verwendung von Meerschweinchen stellt derzeit einen relativ engen Bereich der Forschung und beschreibenden Daten zu spezifischen Methodik ist entsprechend knapp. Die anatomischen Merkmale der Meerschweinchen sind etwas anders als andere Nagetiermodellen, daher Modulation von Stichprobenverfahren für artenspezifische Unterschiede unterzubringen, zB., Im Vergleich zu Mäusen und Ratten, sind notwendig, um eine ausreichende und qualitativ hochwertige Proben zu erhalten. Wie lange und kurze Laufzeit in-vivo-Studien erfordern oft wiederholte Entnahme von Blut die Wahl der Technik sollte auch, um Stress und Unbehagen bei den Tieren zu reduzieren, sondern auch in Betracht gezogen werden, um das Überleben als auch die Einhaltung der Anforderungen der Stichprobengröße und die Zugänglichkeit zu gewährleisten. Venöse Blutproben können bei einer Reihe von Standorten in Meerschweinchen zB erhalten werden., Die Vena jugularis undVenen, jede Technik, die sowohl Vor-und Nachteile von 4,5. Hier stellen wir vier verschiedene Techniken zur Blutentnahme entweder bewusst oder betäubt Meerschweinchen. Die Verfahren sind alle Nicht-Terminal-Verfahren vorgesehen, dass die Probenvolumina und die Anzahl der Proben nicht bei Labortieren 6 nicht Richtlinien für die Blutentnahme überschreiten. Alle beschriebenen Methoden wurden gründlich getestet und angewandt für die in vivo Blutentnahme in Studien innerhalb unserer Forschungseinrichtung wiederholt.
Introduction
Das Meerschweinchen ist ein wertvolles und validiert experimentellen Tiermodell aufgrund einer Reihe von biologischen Ähnlichkeiten zum Menschen wie das Erfordernis einer diätetischen Versorgung mit Vitamin C, vergleichbar Plasma-Lipoprotein-Stoffwechselenzyme und Lipoprotein-Profile sowie gemeinsamen Ähnlichkeiten mit der menschlichen Plazenta und pränatalen Entwicklung 1-3,7,8. Dies macht die Meerschweinchen eine attraktive und geeignete Modell für die Untersuchung die Auswirkungen der Ernährung-assoziierten Erkrankungen wie nicht-alkoholische Fettlebererkrankungen, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und vermeintliche Wirkungen von Vitamin-C-Mangel, sondern auch die Wirkung von zB., Mütterliche diätetische Intervention auf der Entwicklung Nachkommen.
Wiederholte Entnahme von Blut wird häufig sowohl in lang-und kurzfristigen in-vivo-Untersuchungen erforderlich. Aufgrund artenspezifischer anatomischer Unterschiede Modulation der Entnahmetechnik ist notwendig, um Blutproben beim Meerschweinchen im Vergleich zu anderen Tiermodellen erhalten <sup> 4,5. Dies beinhaltet Variation im Verlauf der Venen und Arterien, und auch, daß Meerschweinchen nicht einen Schwanz, wodurch unterschiedliche Anforderungen und Möglichkeiten sowohl für die Probenahme und Handhabung. Probenahme aus der Vena oder Fußwurzel Vene, induziert minimalen Beschwerden und Stress im Tier und erfordert keine Narkose 3,9. Diese Technik ermöglicht die wiederholte Proben von kleinen Blutmengen (100-400 ul), zB., Biochemische Marker im Plasma zu bestimmen. Falls eine noch kleinere Größe ausreichend ist (50-100 ul), kann dies sehr einfach durch Durchstoßen der Ohrvene erhalten werden. Diese Technik kann auch in wachen Tieren durchgeführt werden und ist beispielsweise nützlich, wenn die Messung des Blutzucker 10,11. Probenahme aus der Halsschlagader können für die Sammlung von größeren Mengen Blut (1-2 ml), sondern erfordert Anästhesie.
Hier stellen wir vier verschiedene Techniken zur Blutentnahme entweder bewusst oder betäubt Meerschweinchen. Das procedures sind alle Nicht-Terminal-Verfahren vorgesehen, dass die Probenvolumina und die Anzahl der Proben nicht bei Labortieren 6 nicht Richtlinien für die Blutentnahme überschreiten. Es ist im Interesse der guten Wissenschaft sowie des Tierschutzes, dass Stress auf ein Minimum gehalten werden. Folglich kann nur gut ausgebildete und kompetente persönliche sollten die Tierversuche durchführen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Im Vergleich zu Mäusen und Ratten, Meerschweinchen sind von Natur aus ängstlich und muss ruhig angegangen und richtig, um Stress zu reduzieren behandelt werden. Aus Tierschutzsicht, mit Sorgfalt handeln, sind natürlich eine Priorität; jedoch wird dies auch das Risiko von Angst damit verbundenen Auswirkungen auf die erfassten Daten beispiels., erhöhte Blutspiegel von Corticosteroiden und Glucose 12. Ebenso wird täglich Umgang mit den Tieren zu normalen Verfahren zu gewöhnen und kann dazu dienen…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir erkennen die geschickte Unterstützung von Annie B. Kristensen, Elisabeth V. Andersen, Belinda B. Bringtoft und den Tierpflegern bei der Abteilung für Experimentelle Medizin, Frederiksberg Campus, Fakultät für Gesundheit und Medizin, Universität von Kopenhagen, Dänemark. Jacob Lønholdt wird dankte für die hervorragende technische Unterstützung bei Dreharbeiten die Verfahren. Diese Studie wurde zum Teil durch die LIFEPHARM Center zur in vivo-Pharmakologie und Universität Kopenhagen unterstützt.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Electric shaver | Wella (Contura), Denmark | 273207 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Syringes | B.Braun-Omnifix-F, Germany | 9161406V | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Needles | BD Microlance,Spain | 301156 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Microvette collection tube | Sarstedt, D-51588Nümbrecht, Germany | 201,288,100 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Accu-Check analyzer | Roche A/S Diagnostics, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Heparin 5000 IE/ml | LEO Pharma, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Zoletil 50, Chemvet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Neutral eye ointment | Alternative product may be used. Multiple suppliers | ||
| Gauze or a cotton swab | Alternative product may be used. Multiple suppliers | ||
| Disinfectant (70% alcohol) | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
References
- DeOgburn, R., et al. Effects of increased dietary cholesterol with carbohydrate restriction on hepatic lipid metabolism in Guinea pigs. Comp.Med. 62 (2), 109-115 (2012).
- Fernandez, M., Volek, J. S. Guinea pigs a suitable animal model to study lipoprotein metabolism, atherosclerosis and inflammation. Nutr Metab (Lond). 3 (17), (2006).
- Frikke-Schmidt, H., Tveden-Nyborg, P., Birck, M. M., Lykkesfeldt, J. High dietary fat and cholesterol exacerbates chronic vitamin C deficiency in guinea pigs. Br J Nutr. 105 (1), 54-61 (2011).
- Hem, A., Smith, A. J., Solberg, P. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Lab Anim. 32 (4), 364-368 (1998).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Guillen, J. FELASA guidelines and recommendations. J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 311-321 (2012).
- Ye, P., Cheah, I. K., Halliwell, B. High fat diets and pathology in the guinea pig Atherosclerosis or liver damage. Biochim Biophys Acta. 1832 (2), 355-364 (2013).
- Tveden-Nyborg, P., et al. Maternal vitamin C deficiency during pregnancy persistently impairs hippocampal neurogenesis in offspring of guinea pigs. PLoS One. 7 (10), 12-18391 (2012).
- Schjoldager, J. G., Tveden-Nyborg, P., Lykkesfeldt, J. Prolonged maternal vitamin C deficiency overrides preferential fetal ascorbate transport but does not influence perinatal survival in guinea pigs. Br J Nutr. 110 (9), 1573-1579 (2013).
- Greulich, S., et al. Secretory products of guinea pig epicardial fat induce insulin resistance and impair primary adult rat cardiomyocyte function. J Cell Mol Med. 15 (11), 2399-2410 (2011).
- Swifka, J., Weiss, J., Addicks, K., Eckel, J., Rosen, P. Epicardial fat from guinea pig a model to study the paracrine network of interactions between epicardial fat and myocardium. Cardiovasc Drugs Ther. 22 (2), 107-114 (2008).
- Pilny, A. A. Clinical hematology of rodent species. Vet.Clin North Am Exot Anim Pract. 11 (3), 523-vii (2008).
- Franco, N. H., Olsson, I. A. Scientists and the 3Rs: attitudes to animal use in biomedical research and the effect of mandatory training in laboratory animal science. Lab Anim. 48 (1), 50-60 (2014).
- Van, L. J., et al. eAssessing the application of the 3Rs a survey among animal welfare officers in The Netherlands. Lab Anim. 47 (3), 210-219 (2013).
- Sloan, R. C., et al. High doses of ketamine-xylazine anesthesia reduce cardiac ischemia-reperfusion injury in guinea pigs. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (3), 349-354 (2011).
- Jacobson, C. A. A novel anaesthetic regimen for surgical procedures in guinea pigs. Lab Anim. 35 (3), 271-276 (2001).
- Saha, J. K., Xia, J., Grondin, J. M., Engle, S. K., Jakubowski, J. A. Acute hyperglycemia induced by ketamine xylazine anesthesia in rats mechanisms and implications for preclinical models. Exp Biol Med(Maywood). 230 (10), 777-784 (2005).
