Técnicas de coleta de sangue não terminal em cobaias

Summary

Apesar de ser um modelo conhecido, a cobaia representa atualmente um nicho em ciências experimentais em animais e dados limitada disponível sobre a execução da maioria dos procedimentos. Apresentamos aqui quatro abordagens diferentes para não-terminal em técnicas de amostragem de sangue vivo em qualquer cobaias conscientes ou anestesiados.

Abstract

As cobaias possuem várias semelhanças biológicas para os seres humanos e são validados modelos animais experimentais ^1-3. No entanto, o uso de cobaias representa atualmente uma área relativamente estreita de dados de pesquisa e descritivos sobre metodologia específica é correspondentemente escasso. As características anatômicas de cobaias são um pouco diferentes de outros modelos de roedores, daí modulação de técnicas de amostragem para acomodar as diferenças espécie-específicos, por exemplo., Em comparação com camundongos e ratos, são necessários para obter amostras suficientes e de alta qualidade. Como tanto a longo e curto prazo em estudos in vivo, muitas vezes requerem repetidas sangue amostragem a escolha da técnica deve ser bem considerado, a fim de reduzir o estresse e desconforto nos animais, mas também para garantir a sobrevivência, bem como o cumprimento dos requisitos de tamanho da amostra e acessibilidade. Amostras de sangue venoso pode ser obtido em uma série de sites em cobaias por exemplo., A safena e jugularveias, cada uma das técnicas que contém tanto vantagens como desvantagens ^4,5. Aqui, apresentamos quatro técnicas de amostragem de sangue diferentes para ambos cobaias conscientes ou anestesiados. Os procedimentos são todos os procedimentos não-terminal na condição de os volumes de amostra e número de amostras não exceder as diretrizes para coleta de sangue em animais de laboratório ^6. Todos os métodos descritos têm sido exaustivamente testado e aplicado para repetido em amostras de sangue vivo em estudos dentro do nosso centro de pesquisa.

Introduction

A cobaia um modelo experimental animal valioso e validado devido a um número de semelhanças biológicos para os seres humanos, tais como a exigência de uma fonte dietética de vitamina C, a lipoproteína plasmática comparável enzimas que metabolizam e perfis de lipoproteína, bem como semelhanças compartilhadas com placentação humana e desenvolvimento pré-natal ^1-3,7,8. Isso faz com que a cobaia um modelo atraente e adequado para estudar os efeitos de doenças associadas à dieta, como a doença não alcoólica do fígado gorduroso, doenças cardiovasculares e efeitos putativos de deficiência de vitamina C, mas também o efeito de, por exemplo., A intervenção dietética materna sobre o desenvolvimento prole.

Coleta de sangue repetida muitas vezes é necessária tanto em curto e longo prazo em estudos in vivo. Devido às diferenças anatómicas específicas de espécies é necessário modulação da técnica de amostragem, a fim de obter amostras de sangue em cobaias, em comparação com outros modelos de roedores <sup> 4,5. Isto inclui a variação ao longo de veias e artérias, e também que as cobaias não tem uma cauda, ​​assim, ter diferentes requisitos e opções de amostragem e de manuseamento. Amostragem do safena ou veia do tarso, induz o mínimo de desconforto e estresse no animal e não requer anestesia ^3,9. Esta técnica permite que as amostras de pequenas quantidades de sangue (100-400 ul), por exemplo, repetido., Para determinar os marcadores bioquímicos no plasma. Se um tamanho ainda mais pequeno da amostra é suficiente (50-100 ul), este pode facilmente ser obtido por punção da veia da orelha. Esta técnica também pode ser levada a cabo em animais conscientes e é útil, por exemplo, quando a medição da glucose no sangue ^10,11. A amostragem a partir da veia jugular permite a recolha de maiores quantidades de sangue (1-2 ml), mas requer anestesia.

Aqui, apresentamos quatro técnicas de amostragem de sangue diferentes para ambos cobaias conscientes ou anestesiados. O procedures são todos os procedimentos não-terminal na condição de os volumes de amostra e número de amostras não exceder as diretrizes para coleta de sangue em animais de laboratório ^6. É no interesse da boa ciência, bem como de bem-estar animal que o estresse deve ser reduzido ao mínimo. Consequentemente, apenas bem treinados e pessoal competente deve executar os procedimentos com animais.

Protocol

Os procedimentos mostrados foram realizados de acordo com protocolos aprovados pelo animal dinamarquês Experimentação Inspecção no âmbito do Ministério da Alimentação, Agricultura e Pescas. 1. Sangue Amostragem do lateral safena ou Tarsal Veia Execute este procedimento sem anestesia e com a ajuda de um investigador, uma manipulação a cobaia, e uma coleta de amostra. Raspar a região tarsal da perna com um barbeador elétrico até que as veias são visíveis. C…

Representative Results

Quatro abordagens diferentes para in vivo de técnicas de amostragem de sangue não-terminal, nem em cobaias conscientes ou anestesiados foram apresentados. Figura 1 ilustra o curso da safena lateral e veia tarsal na cobaia e possíveis locais de punção. Veias da orelha visíveis na superfície dorsal de uma orelha da cobaia são ilustrados na Figura 2 Estas veias pode ser utilizado para a amostragem de sangue, quando apenas um volume muito pequeno, é necessária. A posiçã…

Discussion

Em comparação com camundongos e ratos, cobaias estão com medo, por natureza e deve ser abordada com calma e tratada corretamente, a fim de reduzir o estresse. Do ponto de vista do bem-estar animal, agindo com cuidado é naturalmente uma prioridade; no entanto, este também irá reduzir o risco de efeitos associados a ansiedade sobre o por exemplo, dados coletados., aumento dos níveis sanguíneos de corticosteróides e glicose ^12. Da mesma forma, a movimentação diária irá habituar os animais c…

Materials

Name of Material/ Equipment	Company	Catalog Number	Comments/Description
Electric shaver	Wella (Contura), Denmark	273207	Alternative product may be used. Multiple suppliers
Syringes	B.Braun-Omnifix-F, Germany	9161406V	Alternative product may be used. Multiple suppliers
Needles	BD Microlance,Spain	301156	Alternative product may be used. Multiple suppliers
Microvette collection tube	Sarstedt, D-51588Nümbrecht, Germany	201,288,100	Alternative product may be used. Multiple suppliers
Accu-Check analyzer	Roche A/S Diagnostics, Denmark		Alternative product may be used. Multiple suppliers
Heparin 5000 IE/ml	LEO Pharma, Denmark		Alternative product may be used. Multiple suppliers
Anesthesia	Zoletil 50, Chemvet, Denmark		Alternative product may be used. Multiple suppliers
Anesthesia	Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, Denmark		Alternative product may be used. Multiple suppliers
Anesthesia	Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, Denmark		Alternative product may be used. Multiple suppliers
Neutral eye ointment			Alternative product may be used. Multiple suppliers
Gauze or a cotton swab			Alternative product may be used. Multiple suppliers
Disinfectant (70% alcohol)			Alternative product may be used. Multiple suppliers