Icke Terminal Blood Provtagningstekniker i marsvin
Summary
Även en känd modell, representerar marsvin närvarande en nisch i försöksdjursvetenskap och begränsade data finns tillgängliga för utförandet av de flesta förfaranden. Här presenterar vi fyra olika metoder för icke-terminal in vivo blodprovtagningsmetoder i antingen medvetna eller sövda marsvin.
Abstract
Marsvin har flera biologiska likheter med människor och valideras experimentella djurmodeller 1-3. Däremot representerar användningen av marsvin för närvarande ett relativt smalt område av forskning och beskrivande data om särskild metod är på motsvarande knapp. De anatomiska funktioner i marsvin skiljer sig något från andra djurmodeller, därav modulering av urvalsmetoder för att rymma för artspecifika skillnader, t ex., Jämfört med möss och råttor, är nödvändiga för att få tillräckliga och högkvalitativa prover. Eftersom både lång och kort sikt in vivo-studier ofta kräver upprepade blodprover valet av teknik bör vara väl övervägas för att minska stress och obehag i djuren utan också för att säkerställa överlevnaden och överensstämmelse med kraven i provstorlek och tillgänglighet. Venblodprover kan erhållas från ett antal platser i marsvin t.ex.., Vena och halsvenenvener, varje teknik som innehåller både fördelar och nackdelar 4,5. Här presenterar vi fyra olika blodprovtagningsmetoder för antingen medvetna eller sövda marsvin. Procedurerna är alla icke-terminalförfaranden under förutsättning att provvolymer och antal prover inte överstiger riktlinjer för blodinsamling i försöksdjur 6. Alla de beskrivna metoderna är noggrant testade och tillämpas för upprepad in vivo provtagning blod i studier inom vår forskningsanläggning.
Introduction
Den marsvin är en värdefull och validerad experimentell djurmodell på grund av ett antal biologiska likheter med människan, såsom ett krav på kost tillförsel av C-vitamin, jämförbar plasma lipoprotein enzymer och lipoprotein profiler, samt delade likheter med människans placentation och prenatal utveckling 1-3,7,8. Detta gör marsvin en attraktiv och lämplig modell för att studera effekter av kost-associerade sjukdomar såsom alkoholfri fettlever, hjärt-kärlsjukdomar och förmodade effekter av C-vitaminbrist, men också effekten av t ex., Maternal dietary intervention på utvecklings avkomma.
Upprepad provtagning blod krävs ofta både lång och kort sikt in vivo-studier. På grund av artspecifika anatomiska skillnader modulering av provtagningsteknik som är nödvändigt för att erhålla blodprover hos marsvin jämfört med andra gnagarmodeller <sup> 4,5. Detta innefattar variation i loppet av vener och artärer, och även att marsvin inte har en svans, sålunda har olika krav och alternativ för både provtagning och hantering. Provtagning från vena eller tarsala ven, inducerar minsta möjliga obehag och stress hos djuret och inte kräver anestesi 3,9. Denna teknik medger upprepade prov av små mängder blod (100-400 | il), t ex., För att bestämma biokemiska markörer i plasma. Om en ännu mindre provstorleken är tillräcklig (50-100 | il), kan detta helt enkelt erhållas genom att punktera örvenen. Denna teknik kan även utföras i medvetna djur och är användbart till exempel vid mätning av blodglukos 10,11. Provtagning från jugularvenen möjliggör insamling av större mängder blod (1-2 ml) men kräver narkos.
Här presenterar vi fyra olika blodprovtagningsmetoder för antingen medvetna eller sövda marsvin. Den procedures är alla icke-terminalförfaranden under förutsättning att provvolymer och antal prover inte överstiger riktlinjer för blodinsamling i försöksdjur 6. Det är av intresse för god vetenskap samt för djurens välbefinnande att stress bör hållas till ett minimum. Följaktligen kan endast välutbildad och kompetent personal bör utföra djurförsök.
Protocol
Representative Results
Discussion
Jämfört med möss och råttor, marsvin är rädda av naturen och måste närma sig lugnt och hanteras på rätt sätt för att minska stress. Ur djurskyddssynpunkt, båda med omsorg är naturligtvis en prioritering; Men kommer detta också att minska risken för ångestrelaterade effekter på insamlade data t ex., förhöjda blodnivåer av kortikosteroider och glukos 12. På samma sätt kommer daglig hantering vänja djuren till normala rutiner och kan tjäna till att minska stressen ytterligare. P…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi erkänner skicklig hjälp av Annie B. Kristensen, Elisabeth V. Andersen, Belinda B. Bringtoft och djur vaktmästare vid institutionen för experimentell medicin, Frederiksberg Campus, Fakulteten för Hälsa och medicinska vetenskaper, Köpenhamns universitet, Danmark. Jacob Lønholdt är tackade för hans utmärkta tekniskt bistånd filma förfarandena. Denna studie stöddes delvis av LIFEPHARM Centrum för in vivo farmakologi och Köpenhamns universitet.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Electric shaver | Wella (Contura), Denmark | 273207 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Syringes | B.Braun-Omnifix-F, Germany | 9161406V | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Needles | BD Microlance,Spain | 301156 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Microvette collection tube | Sarstedt, D-51588Nümbrecht, Germany | 201,288,100 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Accu-Check analyzer | Roche A/S Diagnostics, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Heparin 5000 IE/ml | LEO Pharma, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Zoletil 50, Chemvet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Neutral eye ointment | Alternative product may be used. Multiple suppliers | ||
| Gauze or a cotton swab | Alternative product may be used. Multiple suppliers | ||
| Disinfectant (70% alcohol) | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
References
- DeOgburn, R., et al. Effects of increased dietary cholesterol with carbohydrate restriction on hepatic lipid metabolism in Guinea pigs. Comp.Med. 62 (2), 109-115 (2012).
- Fernandez, M., Volek, J. S. Guinea pigs a suitable animal model to study lipoprotein metabolism, atherosclerosis and inflammation. Nutr Metab (Lond). 3 (17), (2006).
- Frikke-Schmidt, H., Tveden-Nyborg, P., Birck, M. M., Lykkesfeldt, J. High dietary fat and cholesterol exacerbates chronic vitamin C deficiency in guinea pigs. Br J Nutr. 105 (1), 54-61 (2011).
- Hem, A., Smith, A. J., Solberg, P. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Lab Anim. 32 (4), 364-368 (1998).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Guillen, J. FELASA guidelines and recommendations. J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 311-321 (2012).
- Ye, P., Cheah, I. K., Halliwell, B. High fat diets and pathology in the guinea pig Atherosclerosis or liver damage. Biochim Biophys Acta. 1832 (2), 355-364 (2013).
- Tveden-Nyborg, P., et al. Maternal vitamin C deficiency during pregnancy persistently impairs hippocampal neurogenesis in offspring of guinea pigs. PLoS One. 7 (10), 12-18391 (2012).
- Schjoldager, J. G., Tveden-Nyborg, P., Lykkesfeldt, J. Prolonged maternal vitamin C deficiency overrides preferential fetal ascorbate transport but does not influence perinatal survival in guinea pigs. Br J Nutr. 110 (9), 1573-1579 (2013).
- Greulich, S., et al. Secretory products of guinea pig epicardial fat induce insulin resistance and impair primary adult rat cardiomyocyte function. J Cell Mol Med. 15 (11), 2399-2410 (2011).
- Swifka, J., Weiss, J., Addicks, K., Eckel, J., Rosen, P. Epicardial fat from guinea pig a model to study the paracrine network of interactions between epicardial fat and myocardium. Cardiovasc Drugs Ther. 22 (2), 107-114 (2008).
- Pilny, A. A. Clinical hematology of rodent species. Vet.Clin North Am Exot Anim Pract. 11 (3), 523-vii (2008).
- Franco, N. H., Olsson, I. A. Scientists and the 3Rs: attitudes to animal use in biomedical research and the effect of mandatory training in laboratory animal science. Lab Anim. 48 (1), 50-60 (2014).
- Van, L. J., et al. eAssessing the application of the 3Rs a survey among animal welfare officers in The Netherlands. Lab Anim. 47 (3), 210-219 (2013).
- Sloan, R. C., et al. High doses of ketamine-xylazine anesthesia reduce cardiac ischemia-reperfusion injury in guinea pigs. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (3), 349-354 (2011).
- Jacobson, C. A. A novel anaesthetic regimen for surgical procedures in guinea pigs. Lab Anim. 35 (3), 271-276 (2001).
- Saha, J. K., Xia, J., Grondin, J. M., Engle, S. K., Jakubowski, J. A. Acute hyperglycemia induced by ketamine xylazine anesthesia in rats mechanisms and implications for preclinical models. Exp Biol Med(Maywood). 230 (10), 777-784 (2005).
